[发明专利]一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法

摘要

本发明公开一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法。通过配制电极缓冲液、样品提取液、分离胶缓冲液、分离胶溶液、浓缩胶缓冲液、浓缩胶溶液和3％的过氧化氢、染色液试剂，制备选用杂交玉米种子的样品和过凝胶制备，通过采用电泳、卸板、染色、洗板，计算电泳测定值，保存胶板，计算出杂交玉米的纯度值。本发明取分离胶和浓缩胶缓冲液定容的步骤，简化胶溶液配制程序，缓冲液不定容，待溶解完药品后将溶液一次性定容，这样配出来的浓缩胶溶液和分离胶溶液用于试验丝毫不会影响谱带的清晰性和完整性，而且配溶液过程减少了两个定容环节，更易操作，具有广泛的应用价值。

主权项

一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法，通过配制电极缓冲液、样品提取液、分离胶缓冲液、分离胶溶液、浓缩胶缓冲液、浓缩胶溶液、过氧化氢和染色液试剂，制备选用杂交玉米种子的样品和凝胶制备，通过采用电泳、卸板、染色、洗板，计算电泳测定值，保存胶板，计算出杂交玉米的纯度值，其特征在于，所述的方法具体包括如下步骤：(1)分离胶溶液：取1.43ml乳酸钠于1000ml烧杯中，加去离子水980ml，用乳酸调至PH3.0，备用，取消常用的定容步骤；称取丙烯酰胺112.5g，甲叉双丙烯酰胺3.75g，抗坏血酸0.25g，硫酸亚铁8.0mg，用分离胶缓冲液溶解，定容至1000ml，过滤于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存；(2)浓缩胶溶液：取0.30乳酸钠于200ml烧杯中，加去离子水90ml，用乳酸调至PH5.2，定容至100ml，备用，取消常用的定容步骤；称取丙烯酰胺6.00g，甲叉双丙烯酰胺1.00g，抗坏血酸0.03g，硫酸亚铁0.8mg，用浓缩胶缓冲液溶解，定容至100ml，贮于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存；(3)从送验样品中随机数取玉米种子100粒，用单籽粒粉碎器逐粒粉碎，放入1.5ml离心管中，按体积比1∶1.2的量用滴管加入样品提取液，摇匀，放置5min后再摇一次，30min后用离心机在5000r/min条件下离心15min，取消了常用的样品提取液的离心步骤，备用；(4)灌分离胶采用：底缝封住后，吸去因凝胶而析出的水，量取分离胶溶液，加入过氧化氢或过硫酸铵溶液，迅速摇匀；倾斜电泳槽，将分离胶溶液倒入两玻璃板之间，高度距短玻璃板上沿1.2cm，放平电泳槽并在试验台上振动后静置于桌面10min，取消了常用正丁醇镇压分离胶液面的步骤；灌浓缩胶：量取浓缩胶溶液，加入过氧化氢或过硫酸铵溶液，迅速摇匀，倒入两玻璃板之间，马上插好样品梳，样品梳底部距分离胶顶部0.5cm。