[发明专利]一种检测S1核酸酶及其抑制剂的荧光方法

摘要

本发明是一种利用寡核苷酸和氧化石墨烯检测S1核酸酶及其抑制剂的荧光方法。该方法以氧化石墨烯为固相载体，通过其与核酸碱基之间的相互作用使染料标记的寡核苷酸探针吸附在表面并将其荧光猝灭。未被降解的互补链可以与探针杂交形成双螺旋结构并从氧化石墨烯表面脱离，体系荧光得以恢复；当有S1核酸酶存在时，互补链被降解成小的碱基片段，不能与探针形成双螺旋结构，探针仍然吸附在氧化石墨烯表面，荧光呈猝灭状态；腺苷三磷酸可有效抑制核酸酶对互补链的降解作用，从而使体系的荧光恢复。因此，通过检测体系荧光强度的变化即可实现对S1核酸酶及其抑制剂的检测。本发明方法简便、快速、具有较高的灵敏度和选择性，在核酸酶检测方面具有重要的意义。

主权项

一种检测S1核酸酶及其抑制剂的荧光方法，其特征在于该方法包括以下步骤：a.将染料标记的寡核苷酸荧光探针加入到缓冲溶液中，以480nm为激发波长，进行荧光检测，记录该探针的荧光发射谱带；b.将氧化石墨烯加入到上述溶液中，氧化石墨烯作为固相载体吸附自由卷曲状态的寡核苷酸探针，形成寡核苷酸/氧化石墨烯复合物，此时染料的荧光被氧化石墨烯猝灭；c.经S1核酸酶切割的寡核苷酸互补链，加入到寡核苷酸/石墨烯复合物中进行反应；d.寡核苷酸互补链经过S1核酸酶的特异性降解作用形成小的碱基片段，无法与氧化石墨烯表面的寡核苷酸链探针形成双螺旋结构，从而寡核苷酸探针不能脱离氧化石墨烯的表面，染料的荧光信号不能恢复；根据荧光信号恢复的程度实现对S1核酸酶的定性及定量检测；e.寡核苷酸互补链在抑制剂腺苷三磷酸存在下经S1核酸酶降解作用，加入寡核苷酸/氧化石墨烯复合物中进行反应；f.寡核苷酸互补链在抑制剂腺苷三磷酸存在下不会被S1核酸酶降解，与寡核苷酸探针形成双螺旋结构，寡核苷酸探针脱离氧化石墨烯的表面，染料的荧光信号得以恢复；根据荧光信号恢复的程度实现对抑制剂腺苷三磷酸的定性及定量检测。