[发明专利]一种农杆菌转化大豆的方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌转化大豆的方法，包括对干燥的大豆种子用氯气法进行消毒，接种到萌发培养基上萌发，获得无菌苗，切制大豆子叶节，用液体培养基，调制活化的农杆菌菌液，调整pH值，然后侵染子叶节，将子叶节转移到共培养基上，调整pH值，在光照条件下进行共培养，将共培养后的大豆子叶节进行脱菌后，转到不定芽诱导培养基上进行芽诱导及筛选培养，15天继代一次，直到抗性芽长出；抗性芽经过伸长、生根、移栽、对植株进行鉴定，获得转化植株。本发明获得的农杆菌转化大豆子叶节的共培养方法，可显著提高农杆菌转化大豆子叶节的效率，对加快大豆转基因育种有重要的理论及实践意义。

主权项

一种农杆菌转化大豆的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）对干燥的大豆种子用氯气法进行消毒12‑16h，接种到萌发培养基上萌发4‑6d，获得无菌苗，切制大豆子叶节；（2）用液体培养基，其成分为：1/10 B5+1.7mg/L 6‑BA+200μmol/L乙酰丁香酮+400mg/L L‑半胱氨酸+1mmol/L二硫苏糖醇+1mmol/L硫代硫酸钠+3mmol/L MES+3%蔗糖，pH值为6.0‑7.2，调制活化的农杆菌菌液达到OD600为：0.4‑0.6，然后侵染子叶节30‑60min；（3）将上述的子叶节转移到共培养基上，共培养基成分为：1/10 B5+1.7mg/L 6‑BA+200μmol/L乙酰丁香酮+400mg/L L‑半胱氨酸+1mmol/L二硫苏糖醇+1mmol/L硫代硫酸钠+3mmol/L MES+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH值为6.0‑7.2，在0‑16h/d光照、22‑25℃条件下，共培养3‑10天；（4）将上述共培养后的大豆子叶节进行脱菌后，转到不定芽诱导及筛选培养基上进行芽诱导及筛选培养，15天继代一次，直到抗性芽长出，诱导及筛选培养基成分为B5 +1.7mg/L 6‑BA +100mg/LKm +250mg/LCarb +250mg/LCef+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8；（5）将上述的抗性芽转移到芽伸长培养基上，芽伸长培养基成分为：B5 + 1.0mg/LGA3 + 100mg/LKm + 250mg/LCarb + 250mg/LCef +3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8；（6）抗性芽生长到4‑6cm后，转移到生根培养基上，生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L IBA+0.2mg/L NAA+250mg/LCef+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8； （7）当根长达到4‑6cm后，将苗移栽到营养土中，将苗用薄膜覆盖，待新叶长出后去掉薄膜，获得转化植株。