[发明专利]一种牛血清白蛋白非标记质谱定性、定量检测方法

摘要

本发明公开了一种牛血清白蛋白非标记质谱定性、定量检测方法，步骤如下：(1)蛋白的酶解；(2)液相色谱检测：对蛋白的酶解产物进行液相色谱检测；(3)定性检测：定性检测的肽段为：HLVDEPQNLIK，检测蛋白的酶解产物中是否含有该肽段，若有，则证明待检测的蛋白样品为牛血清白蛋白，若没有，则证明待检测的蛋白样品不是牛血清白蛋白；(4)定量检测：定量检测的肽段为：ATEEQLK，检测蛋白的酶解产物中该肽段的浓度，通过以下公式计算得出牛血清白蛋白的浓度：y＝51925x-491814，R2＝0.9991。本方法的方法操作简单，检测快速，成本较低，且专一性强，可用于已知蛋白的定性、定量检测。

主权项

一种牛血清白蛋白非标记质谱定性、定量检测方法，其特征在于，步骤如下：(1)蛋白的酶解：将50μg待检测的蛋白样品溶于8.34μL含有尿素、DTT和NH4HC03的水溶液中，置于37℃水浴中还原4h，然后加入0.84μL碘乙酰胺溶液，放置暗处1h，再加58.34μL NH4HCO3溶液，最后加入1μg胰蛋白酶，37℃保温反应16h，反应结束后，冷冻干燥成粉末备用；所述含有尿素、DTT和NH4HCO3的水溶液中，含有尿素、DTT和NH4HCO3的水溶液中，尿素的浓度为8M，DTT的浓度为10mM，NH4HCO3的浓度为50mM；所述碘乙酰胺溶液中碘乙酰胺的浓度为0.5M；所述NH4HCO3溶液的浓度为50mM；(2)液相色谱检测：对上述蛋白的酶解产物进行液相色谱检测，蛋白酶解产物的进样量不低于100ng，液相的梯度条件为：0‑5min，B相保持5％；5‑45min，B相从5％升至45％；45‑50min，B相从45％升至95％；50‑55min，B相从95％降至5％，柱后平衡10min；流速为0.2‑0.6mL/min；(3)定性检测：定性检测的肽段为：HLVDEPQNLIK，检测蛋白的酶解产物中是否含有该肽段，若有，则证明待检测的蛋白样品为牛血清白蛋白，若没有，则证明待检测的蛋白样品不是牛血清白蛋白；(4)定量检测：定量检测的肽段为：ATEEQLK，检测蛋白的酶解产物中该肽段的浓度，通过以下公式计算得出牛血清白蛋白的浓度：在蛋白浓度为10μg/mL‑500μg/mL的线性范围内，该肽段的浓度与丰度线性方程为：y＝51925x‑491814，R2＝0.9991，其中，x：牛血清白蛋白的浓度，y：肽段ATEEQLK的丰度。