[发明专利]利用液相色谱检测系统定量口蹄疫抗原中146S含量的方法有效
| 申请号： | 201110275160.3 | 申请日： | 2011-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN102998378A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 倪春霞;徐树兰;李少英;赵炳武;辛俊宝;张澍;王钦富;武华 | 申请（专利权）人： | 内蒙古必威安泰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;费碧华 |
| 地址： | 011517 内蒙古自治区*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用液相色谱检测系统定量口蹄疫抗原146S含量的方法，包括：首先用硫酸鱼精蛋白纯化病毒，然后用PEG6000浓缩病毒，浓缩后的病毒进行蔗糖密度梯度超速离心，使用液相色谱检测系统检测离心后样品在波长259nm处的吸收峰，最后根据公式C＝FRS/76Wb计算出146S的含量。本发明方法可用于各型口蹄疫抗原146S含量的测定，通过定量口蹄疫抗原中146S的含量能够指导口蹄疫疫苗的配制，间接评价疫苗的效力，这对于提升我国口蹄疫疫苗质量具有重大指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 色谱 检测 系统 定量 口蹄疫 抗原 146 含量 方法 | ||
【主权项】：
一种利用液相色谱检测系统定量测定口蹄疫抗原中146S含量的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)病毒纯化：向待测的口蹄疫病毒样品中加入硫酸鱼精蛋白，使加入的硫酸鱼精蛋白的终浓度为0.5～2.0mg/ml，室温作用0.5～2h，5000～10000rpm离心15min～1h，分离得到上清液；(2)PEG6000浓缩病毒：按质量体积百分比计，向获得的上清液中加入NaCl，使NaCl的终浓度为2～6％，充分溶解后加入PEG6000，使PEG6000的终浓度为5～10％，2～8℃下搅拌混合1～16h，5000～10000rpm离心1～2h，获得口蹄疫病毒沉淀，使用TEN缓冲液重悬病毒沉淀，得到病毒浓缩液；(3)蔗糖密度梯度超速离心：制备质量体积比为15％～45％的均匀线性蔗糖梯度液，将步骤(2)得到的病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度超速离心，6～10℃，30000～40000rpm，离心2.5～3.5h，得到超速离心样品；(4)液相色谱检测系统检测：将步骤(3)得到的超速离心样品连续通过液相色谱检测系统，对超速离心样品在波长259nm处的吸收值进行连续检测，得到超速离心样品在波长259nm处的吸收图谱；(5)计算146S含量：根据液相色谱工作站所测得的146S在259nm处的吸收峰面积，由以下公式计算出146S的含量，C＝FRS/76Wb上述公式中，C为样品中146S含量；FR为样品通过样品池的流速；S为液相色谱工作站在波长259nm处所检测样品中146S的吸收峰面积；W为加在梯度液上的病毒样品的体积；b为流动样品池的光程长度。
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