[发明专利]不同血清型霍乱弧菌的m-PCR检测试剂盒及检测方法

摘要

不同血清型霍乱弧菌的m-PCR检测试剂盒及检测方法，该试剂盒中包括SEQ IDNOS.1/2、SEQ ID NOS.4/5、SEQ ID NOS.7/8的检测引物和SEQ ID NO.3、SEQ IDNO.6、SEQ ID NO.9的探针序列。与经典方法的细菌分离、鉴定和血清学分型试验方法相比，本发明方法更快速、准确。且较一般的多重PCR方法特异性强，灵敏度高，能够同时检测和鉴定O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌和非O1/非O139群霍乱弧菌。对此三种菌的检测特异性均为100％，检测灵敏度分别为O1群霍乱弧菌：19CFU/ml、O139群霍乱弧菌：22CFU/ml、非O1/非O139群霍乱弧菌：17CFU/ml。

主权项

不同血清型霍乱弧菌的m‑PCR检测试剂盒，其特征在于包括如下引物和探针：①霍乱弧菌的O1群rfb基因的检测引物和探针序列：正向引物(SEQ ID NO.1)：5′‑GCCCGTTTTGCATTATGGAT‑3′，反向引物(SEQ ID NO.2)：5′‑CCTTTTACCGCCGCAATACGA‑3′，探针(SEQ ID NO.3)：5′FAM‑TGATCCGACAAGCCCAAATGCCACTA(MGB)‑3′；②霍乱弧菌的hlyA基因的检测引物和探针序列：正向引物(SEQ ID NO.4)：5′‑GAGAAATTTGAGCGCAAAGAGGTTT‑3′，反向引物(SEQ ID NO.5)：5′‑ACTTCCACCCCACCAGTCA‑3′，探针(SEQ ID NO.6)：5′NED‑CCAAGCTCAAAACCTG(MGB)‑3′；③霍乱弧菌的O139群rfb基因的检测引物和探针序列：正向引物(SEQ ID NO.7)：5′‑AGTTACCTGTTATGTACGATGAACC‑3′，反向引物(SEQ ID NO.8)：5′‑CCATCACCAGACAAGCATACAG‑3′，探针(SEQ ID NO.9)：5′VIC‑TGCTGACGCCTCTCAAGTGCCTACG(MGB)‑3′。