[发明专利]一种大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA作为PCR标准物质的制备方法无效
| 申请号： | 201110282743.9 | 申请日： | 2011-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN102399774A | 公开（公告）日： | 2012-04-04 |
| 发明（设计）人： | 王利兵;胥传来;勇倩倩 | 申请（专利权）人： | 王利兵;胥传来;勇倩倩 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68;C12R1/19 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人： | 时旭丹;刘品超 |
| 地址： | 410004 湖南省长沙市湘府中*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 一种大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA作为PCR标准物质的制备方法，属于生物学技术领域。本发明采用羧基化的磁性纳米粒子提取了大肠埃希杆菌O157:H7基因组DNA，并进行分离纯化，电感耦合等离子体质谱ICP-MS测定P元素以确定提取DNA浓度，最终进行PCR扩增，电泳检测目的条带明显，-20℃保存半年性质不变，稳定性高，可以作为大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA的PCR标准物质。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大肠 杆菌 o157 h7 基因组 dna 作为 pcr 标准 物质 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种提取纯化大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA作为PCR标准物质的制备方法，其特征在于利用羧基化的磁性纳米粒子提取了大肠埃希杆菌O157:H7基因组DNA；工艺步骤为：(1) 大肠埃希杆菌O157∶H7的培养：按传统培养方法对大肠埃希杆菌O157∶H7进行增菌培养；(2) 表面羧基化的磁性纳米粒子的制备：制备羧基修饰的磁性纳米粒子，用于吸附大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA；(3) 病原微生物大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA的提取；(4) 用步骤(2)得到的大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA过Sephadex G‑200分离柱进行分离纯化；(5) 用步骤(4)得到的纯化后的大肠埃希杆菌O157∶H7基因组DNA测定ICP‑MS计算浓度；(6) 将步骤(4)纯化后的DNA的PCR扩增产物进行PCR检测，琼脂糖电泳检测大肠埃希杆菌O157∶H7的目的条带。
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