[发明专利]牛体细胞病毒诱导方法

摘要

本发明公开了牛体细胞病毒诱导方法。本发明通过慢病毒多次感染牛成纤维细胞后能够简单、高效、快速地引起细胞发生诱变，诱变的细胞在形态和生长性能等方面呈现特征性变化，表现出一定的干细胞特征，诱变形成的细胞改变原有的纤维状形态而呈现细胞集落团，细胞集落生长迅速、形态稳定，常规的冻存和传代对细胞生长性能无明显影响。牛体细胞病毒诱导方法诞生的诱变细胞将会作为一种新型的细胞材料在牛的转基因克隆、新品种培育、育种改良及细胞基因表达调控等方面发挥重要的作用，同时，也为人类及其他物种的细胞提供借鉴和参考。

主权项

牛体细胞病毒诱导方法，包括如下步骤：1)取怀孕2.5月龄牛的胎儿，采用组织块培养法建立牛的胎儿成纤维细胞系；2)磷酸钙介导pLentilox 3.7慢病毒表达载体及其包装组分在293T细胞中包装形成慢病毒颗粒，1216h后更换新鲜高糖DMEM培养液，病毒包装48h后收集含慢病毒的高糖DMEM培养液，经超滤浓缩后添加到牛胎儿成纤维细胞培养板内；3)每天病毒感染一次，共计使用病毒液感染细胞4次，病毒感染2次后更换含1000U/ml LIF、4ng/ml bFGF的高糖DMEM培养液；4)当细胞形态出现集落变化后，将细胞集落经Di s pa s e消化后接种到经丝裂霉素处理的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上培养箱中培养。