[发明专利]一种水环境微生物鉴定方法

摘要

本发明涉及一种水环境微生物鉴定方法，属于生物环境技术领域。发明对常规的PCR-DGGE的工艺方法进行了优化，在第一次得到PCR产物是不是直接用于测序，而是将产物克隆，再次进行PCR检测，得到的阳性质粒再用于测序，可清楚地鉴定出种类繁多的水环境微生物优势类群。而且优化后的方法适用范围广，在不同水体类型、不同污染程度的水环境中均可以发挥预期的功能。

主权项

一种水环境微生物鉴定方法，包括如下步骤：(1)提取底泥中的微生物DNA，(2)用采用通用引物对GC‑F338和R518，PCR扩增目的片段，所述引物GC‑F338：5′‑CGC CCG CCG CGC GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GTAC GGG AGG CAG CAG‑3′，R518：5’‑ATT ACC GCG GCT GCT GG‑3’；(3)DGGE电泳分离PCR产物，(4)DGGE条带的切胶回收后重新PCR，所述引物为F338和R518，所述引物F338：5’‑TAC GGGAGG CAG CAG‑3′，R518：5’‑ATT ACC GCG GCT GCT GG‑3’；(5)回收二次PCR产物，与表达载体连接，转化，培养，提取质粒，PCR检测，(6)阳性质粒测序，确定所含微生物的种类。