[发明专利]一种siRNA 转染哺乳类动物胚胎的电穿孔方法有效
| 申请号： | 201110300097.4 | 申请日： | 2011-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN102329819A | 公开（公告）日： | 2012-01-25 |
| 发明（设计）人： | 常博皞;张涌;彭辉;苏建民 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/873 | 分类号： | C12N15/873 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种siRNA转染胚胎的电穿孔方法，包括以下步骤：1)对胚胎透明带进行弱化处理；2)配制含siRNA的电穿孔溶液；3)将胚胎移入配制好的含siRNA的电穿孔溶液，室温静置，然后再将胚胎连同电穿孔溶液移入电转槽中进行电穿孔。本发明包括对胚胎的透明带的弱化处理和siRNA的络合处理，然后通过将胚胎置于脉冲电场作用下，导致其通透性和膜电导瞬时增大，使在正常生理情况下细胞膜难以通透的siRNA进入细胞。统计学观察分析表明，本发明存活胚胎稳定阳性转染率超过95％，采集的总胚胎实际有效利用率超过70％，是一种安全、简便、高效的siRNA转染哺乳类动物胚胎的技术。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 sirna 转染 哺乳 类动物 胚胎 穿孔 方法 | ||
【主权项】：
一种siRNA转染胚胎的电穿孔方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待转染的胚胎置于台氏液中，室温孵育5～15s，然后终止消化并清洗；2)以opti‑MEM为电转缓冲液进行稀释，用稀释好的待转染siPORTTM与siRNA按摩尔比1∶1～2混合后室温静置10～15min，得到含有siRNA的电穿孔溶液，其中siRNA的终浓度为0.1～1μmol/L；3)将胚胎置于含有siRNA的电穿孔溶液，在脉冲电场下，利用电穿孔法对胚胎进行siRNA转染。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司，未经西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201110300097.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：水系润滑剂
- 下一篇：飞机的机翼以及具有用于影响流动的装置的机翼组件
