[发明专利]一种测定待检测样本中疾病相关核酸分子的核苷酸序列的方法

摘要

本发明涉及一种测定待检测样本中疾病相关核酸分子的核苷酸序列的方法。所述方法包括：对待测样本中片段化的、源自基因组DNA的双链核酸分子末端加入接头，并进行富集；用核酸芯片对含接头的DNA片段进行捕获，将捕获的片段在高通量测序平台进行测序。基于已知的基因位点信息，对测序结果进行分析，可快速、高通量地得到样本中疾病相关核酸分子的核苷酸序列，从而用于例如单基因病的检测。本发明还提供了可用于所述方法的、固定有数种至数万种疾病特异性探针的核酸芯片，以及包含所述芯片的试剂盒。

主权项

一种测定待检测样本中疾病相关核酸分子的核苷酸序列的方法，其特征在于，包括步骤：a.提供一待检测样本，所述样品含有经打断的、源自基因组DNA的双链核酸片段，并且所述核酸片段具有平末端；b.对于上一步骤的所述双链核酸片段，在末端添加接头连接序列；并且通过所述接头连接序列，在所述双链核酸片段的两端添加接头，其中所述接头具有引物结合区以及连接互补区，所述的连接互补区与所述的接头连接序列互补；c.对步骤(b)获得的带有接头的DNA双链核酸片段，用第一引物和第二引物进行PCR扩增，从而获得第一PCR扩增产物的混合物，其中所述的第一引物和第二引物具有对应于所述接头的引物结合区的接头结合区，以及位于接头结合区外侧的测序探针结合区；d.对所述的第一PCR扩增产物的混合物进行单链化，并用封闭分子封闭位于所述扩增产物两端的、对应于第一引物和第二引物的区域，从而获得两端被封闭的单链扩增产物的混合物；e.用核酸芯片，从所述的经封闭的单链扩增产物的混合物中，捕获疾病相关的核酸分子；f.对上一步骤中经捕获的核酸分子，用第三引物和第四引物进行PCR扩增，从而获得第二PCR扩增产物的混合物，其中第三引物和第四引物分别特异性对应于或结合于所述的第一引物和第二引物；g.对上一步骤获得的第二PCR扩增产物的混合物进行测序，从而获得样本中疾病相关核酸分子的核苷酸序列。