[发明专利]乙型肝炎前C区和BCP区基因突变检测试剂盒、检测方法、引物及其探针

摘要

本发明公开了一种乙型肝炎前C区和BCP区基因突变检测试剂盒，属于生物检测技术领域。该试剂盒包括DEPC处理水、具有5’→3’外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCRBuffer、含有Mg2+离子的溶液、nt1896上游引物、nt1896下游引物、nt1896野生型探针、nt1896突变型探针、nt1762/1764上游引物、nt1762/1764下游引物、nt1762/1764野生型探针和nt1762/1764突变型探针；试剂盒中还包括DNA提取液、阴性质控品、工作标准品、阳性质控品和临界阳性质控品。本发明利用TaqMan MGB荧光探针，在PCR反应过程中实时检测荧光信号，免除了PCR产物的后处理步骤，耗时短，操作简便，同时避免了交叉污染，重复性高，结果更准确。与普通探针相比，MGB探针特异性、灵敏度更高。

主权项

一种乙型肝炎前C区和BCP区基因突变检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有：(1)PCR反应液：其中包括DEPC处理水、具有5’→3’外切活性的DNA聚合酶、dNTPs、10×PCRBuffer、含有Mg2+离子的溶液、nt1896上游引物、nt1896下游引物、nt1896野生型探针、nt1896突变型探针、nt1762/1764上游引物、nt1762/1764下游引物、nt1762/1764野生型探针和nt1762/1764突变型探针；①nt1896引物和探针nt1896上游引物序列为：5’CCTACTGTTCAAGCCT‑CCAAGC 3’；nt1896下游引物序列为：5’AGCTCCAAATTCTTTATACGGGTC 3’；nt1896野生型探针序列为：5’TCC‑ATGCCCCAAAGC 3’；nt1896突变型探针序列为：5’TCCATGCCCTAAAGC 3’；②nt1762/1764引物和探针nt1762/1764上游引物序列为：5’CCGACCTTGAGGCAT‑ACTTCA 3’；nt1762/1764下游引物序列为：5’GTTGCATGGTGCTGGTGAAC 3’；nt1762/1764野生型探针序列为：5’CCTAGTACAAA GACCTTTAAC 3’；nt1762/1764突变型探针序列为：5’CCTAGTACAAAGATCATTAAC 3’；其中，上述探针的5’端和3’端分别用荧光基团修饰；(2)DNA提取液：①溶液A，为聚乙二醇6000；②溶液B，其中包括乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸钠、Tris‑HCl和乙基苯基聚乙二醇；(3)质控品①阴性质控品，为不含外源片段的PSG‑TS载体质粒DNA；②阳性质控品，检测nt1896时，为1.0×106copy/mL的含有nt1896相应基因组的DNA片段；检测nt1762/1764时，为1.0×106copy/mL的含有nt1762/1764相应基因组的DNA片段；③临界阳性质控品，检测nt1896时，为1.0×104copy/mL的含有nt1896相应基因组的DNA片段，检测nt1762/1764时，为1.0×104copy/mL的含有nt1762/1764相应基因组的DNA片段；(4)工作标准品：检测nt1896时，为PSG‑TS nt1896质粒DNA溶液；检测nt1762/1764时，为PSG‑TS nt1762/1764质粒DNA溶液。