[发明专利]多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法

摘要

本发明涉及多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法。该方法所用A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp.  pasteurianus；具体操作步骤如下：1、菌株培养；2、菌株的固定化，分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒；3、固定化细胞连续发酵制醋。本发明采用现代生物工程技术进行食醋的生产，彻底改变传统食醋酿造工艺，实现精确调控生产工艺参数的目标；改变传统酿造工艺脏乱差的落后生产环境，降低工人劳动强度；提高原材料的利用率，提高生产效率。

主权项

多菌株固定化细胞组合物连续发酵制醋方法，其特征在于具体操作步骤如下：1.1、菌株培养所用菌株为A菌株和B菌株；A菌株为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，B菌株为巴氏醋杆菌巴氏亚种Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus；1.1.1、A菌株的培养，将酿酒酵母斜面菌种接种至酿酒酵母培养基，温度30℃、转速80~150转/分钟，培养24～48h，使酿酒酵母培养基中的酵母细胞浓度达到5.0×107/mL～1.0×109/mL，得到A菌株菌液；1.1.2、B菌株的培养，将巴氏醋杆菌巴氏亚种斜面菌种接种至醋杆菌培养基，温度30℃、转速80~150转/分钟，培养24～48h，使醋杆菌培养基中的巴氏醋杆菌细胞浓度达到5.0×107/mL～5.0×109/mL，得到B菌株菌液；1.2、菌株的固定化1.2.1、细胞的离心洗涤：取A菌株菌液50mL、B菌株菌液50mL，分别在转速为5000～10000转/分钟条件下，离心分离10～15分钟，倾去上清液，用0.85%生理盐水悬浮细胞，完成一次细胞的离心洗涤；再重复2次细胞的离心洗涤，制得A菌株细胞悬液和B菌株细胞悬液；1.2.2、取A菌株细胞悬液50mL和B菌株细胞悬液50mL，与浓度1％～5％的固定化载体溶液按体积比1:1～4的比例混合均匀，成型造粒，固定化细胞颗粒直径2～5mm，室温固化2～6小时，温度4℃，12小时平衡，倾去上清液，加入无菌水洗涤3次；分别制得A菌株固定化细胞颗粒和B菌株固定化细胞颗粒；所述固定化载体溶液中载体为琼脂或壳聚糖或角叉或聚乙烯醇，溶剂为水；1.3、固定化细胞连续发酵制醋1.3.1、取100g～500g的A菌株固定化细胞颗粒和100g～500g的B菌株固定化细胞颗粒，分别置于容器中，盛有A菌株固定化细胞颗粒的容器为A容器，盛有B菌株固定化细胞颗粒的容器为B容器；A容器的进口和B容器的进口均位于容器上部，A容器的出口和B容器的出口均位于容器下部；1.3.2、A容器的出口连通着B容器的进口；常温下，通过进口向A容器中连续注入2％～6％的蔗糖溶液，控制流速为10～100mL/小时，收集B容器出口流出的发酵液；1～3天平衡后即可由B容器出口连续得到醋酸溶液，醋酸溶液中醋酸含量为1.0～4.0％。