[发明专利]一种微囊藻毒素的快速提取检测方法

摘要

本发明公开了一种微囊藻毒素的快速提取检测方法，其步骤：A、藻样预处理：天然水体中的水华微囊藻样品，经除杂物，用蒸馏水反复清洗后过滤；B、匀浆处理、干重测定：上述A步骤浓缩后的藻浆，按照体积比加入蒸馏水后，用匀浆器匀浆，另取藻浆测干重；C、甲醇一步法抽提毒素：上述B步骤样品干重测定的结果并计算，取藻干重、体积均为已知的藻浆：充分振荡混合后，冰箱中静置提取；D、离心纯化：将上述C步骤处理后的提取液离心，取上清，得到澄清的藻提取液；E、滤器过滤：合并D步骤上清液过滤；F、HPLC检测：采用优化的色谱条件快速分析毒素。本发明有可靠性高、所需仪器简单、操作方便、检测效率高等优点，适于常规实验室进行大批量的毒素提取和分析工作。

主权项

一种微囊藻毒素的快速提取检测方法，其步骤是：A、藻样预处理（1）：天然水体中的水华微囊藻样品，用孔径30‑100 μm的浮游生物网采集，经除去树叶、浮萍有机杂物后，用蒸馏水反复清洗2—4次，再用孔径30‑100μm的浮游生物网浓缩成黏稠状的藻浆；B、匀浆处理、干重测定（2）：上述A步骤浓缩后的藻浆，按照体积比加入2倍体积蒸馏水后，用匀浆器匀浆，使藻细胞团分散和藻浆密度均匀，取藻浆在80℃，24h，烘至恒重后于干燥器中冷却，分析天平上测干重；C、甲醇一步法抽提毒素（3）：根据上述B步骤样品干重测定的结果并计算，取藻干重、体积均为已知的藻浆：其中藻干重为1‑20mg，通过补添蒸馏水和纯甲醇配制得到终体积1‑2ml甲醇浓度为体积比75%的提取液：样品藻干重和甲醇提取液重量体积比1/30000－1/5000，转入2ml Corning冻存管中密封；充分振荡混合后，‑20℃冰箱中静置提取1—4次，每次提取时间为2‑24h；D、离心纯化（4）：将上述C步骤处理后的提取液离心10000 rpm×10min，取上清，得到澄清的藻提取液，离心得到的沉淀采用C步骤的方法继续提取1—3次，离心10000 rpm×10min取上清液；E、0.45μm微滤器过滤（5）：合并D步骤处理得到的上清液，用0.45μm的非水系微滤器过滤处理，取滤液；F、HPLC检测（6）：上述E步骤处理后的藻毒素提取液，用HPLC测定毒素浓度，色谱条件： YMC‑Pack ODS‑AQ色谱柱4.6 mm ×50 mm i.d., 5μm；流动相：乙腈0.1%TFA，水0.1%TFA；流速：2.5ml/min；柱温：40℃；检测波长：238 nm；梯度洗脱所用的时间程序为：0.1‑6 min 。