[发明专利]一种提取大豆种子DNA的方法

摘要

本发明公开了一种大豆种子中高质量DNA的提取方法，解决了大豆种子基因组总DNA提取多糖去除不彻底、难提取的问题。步骤为：取适量大豆种子，粉碎成粉末状；取0.1g大豆样品粉末，加入20％SDS溶液100μl、500μlCTAB提取缓冲液和4μl蛋白酶K，65℃恒温水浴消化60min，每10min颠倒混匀一次；加入36μl 5mol/L KAC，混匀，冰浴30min，离心；取上清，加等体积氯仿/异戊醇，混匀10min，离心；取上清，沿管壁缓慢旋转加入等体积预冷的异丙醇，室温下沉淀，离心；弃上清，70％乙醇洗涤沉淀3次；自然晾干，70μl TE缓冲液溶解沉淀，-20℃冰箱保存。这种方法操作简单、快速，提取的基因组DNA条带清晰，完整性好，纯度最高，杂质含量少，可用于PCR检测，PCR特异性产物明显，重复性好，可以满足许多分子生物学实验需要。

主权项

一种提取大豆种子DNA的方法，其特征在于，步骤如下：(1)取适量大豆种子，粉碎，待用；(2)取0.1g上述粉末，置于1.5ml离心管中，加入100ul 20％的SDS溶液、500ul CTAB提取缓冲液和4ul蛋白酶K，充分混匀后，放入60～65℃恒温水浴锅中消化60min，期间每10min颠倒混匀一次；(3)加入36ul 5mol/L的KAC，混匀，冰浴30min，10000～12000r/min离心10min；(4)取上述离心后的上清液，置于另一离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇，轻柔颠倒混匀10min，10000～12000r/min离心10min；(5)取上述离心后的上清液，沿管壁缓慢旋转加入等体积‑20℃预冷的异丙醇，室温下沉淀，10000～12000r/min离心3min；(6)弃去上述离心后的上清液，用500ul 70％乙醇洗涤沉淀3次，即得大豆种子DNA。