[发明专利]一种选育高产WF16616的寄生弯颈霉突变株的方法

摘要

本发明公开了一种选育生产WF16616的寄生弯颈霉突变菌株的方法，包括：1)将野生型寄生弯颈霉(Tolypocladium parasiticum)单孢子悬浮液紫外诱变，避光涂布平板，挑取高产菌落；2)将步骤1)所得突变株单孢子悬浮液NTG(二硝基胍)诱变，涂布固体平板，从菌落颜色形态变化较大的菌落挑取高产菌落；3)将步骤2)所得突变株的单孢子悬浮液紫外线和NaCl复合筛选，避光涂布含NaCl的平板，从直径中等的菌落中挑取高产菌落；4)将步骤3)所得突变株的单孢子悬浮液紫外线和WF16616复合筛选，避光涂布含WF16616的平板，挑取高产菌落。本发明的方法具有突变和筛选的方向性以及选择的高效性，所得突变株的菌落颜色由野生型的白色变为绿色，发酵产物WF16616产量高，效价高达550-600mg/L，具有工业化价值。

主权项

一种选育生产WF16616的寄生弯颈霉突变菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将野生型寄生弯颈霉(Tolypocladium parasiticum)的单孢子悬浮液进行紫外诱变，即将单孢子悬浮液用紫外光照射，然后避光涂布在固体平板上倒置培养至长出菌落，随机挑取单个菌落进行发酵，检测发酵产物中WF16616的含量，从中筛选出产量较高的突变株；2)将步骤1)得到的WF16616高产突变株的单孢子悬浮液进行NTG(二硝基胍)诱变，即在单孢子悬浮液中加入NTG反应，然后涂布在固体平板上倒置培养至长出菌落，挑取菌落颜色形态变化较大的菌落进行发酵，检测发酵产物中WF16616的含量，筛选出产量较高的突变株；3)将步骤2)得到的WF16616高产突变株的单孢子悬浮液进行紫外线和NaCl复合筛选，即将单孢子悬浮液用紫外光照射，然后避光涂布到含有NaCl的固体平板上倒置培养至长出菌落，选取菌落直径中等的菌落进行发酵，检测发酵产物中WF16616的含量，筛选出产量较高的突变株；4)将步骤3)得到的WF16616高产突变株的单孢子悬浮液进行紫外线和发酵产物WF16616复合筛选，即将单孢子悬浮液用紫外光照射，然后避光涂布到含有发酵产物WF16616的固体平板上倒置培养至长出菌落，随机挑取单个菌落进行发酵，检测发酵产物中WF16616的含量，从中筛选出产量较高的突变株。