[发明专利]有机磷农药生物标志物的检测方法

摘要

本发明公开了有机磷农药生物标志物的检测方法。该方法利用肟类复活剂对抑制后乙酰胆碱酯酶(AChE)的复活作用，用线性扫描法分别测量复活前、后AChE的活性，根据两者之间的活性差异，得到对应乙酰胆碱酯酶加合物OP-AChE含量，从而判断农药的接触水平。该方法以复活后AChE含量作为个体自身的基准，消除了个体间正常水平AChE的变异性。

主权项

有机磷农药生物标志物的检测方法，其特征是电化学检测方法，测定分两个步骤：第一步：乙酰胆碱酯酶加合物的复活及吸附：分别取1.0mL浓度为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL和15ng/mL的对氧磷抑制的乙酰胆碱酯酶混合液，与等体积的5mM碘解磷定混合反应15mi n，让抑制的乙酰胆碱酯酶完全恢复活性，然后加入50μL氯化乙酰硫代胆碱，氯化乙酰硫代胆碱的最终浓度为3mM，温浴反应5min，使其充分反应，产生硫代胆碱，再加入制备好的250μL浓度为1mg/mL Fe3O4/AuNPs磁性纳米粒子，震荡摇匀30min，磁铁磁分离，蒸馏水洗涤，形成待检测的Fe3O4/AuNPs‑硫代胆碱纳米复合物；作为对照，未受对氧磷抑制的3nM乙酰胆碱酯酶与同样浓度的氯化乙酰硫代胆碱混合后加入同样的Fe3O4/AuNPs磁性纳米粒子；第二步：线性扫描法测定：取20μL上述自组装好的Fe3O4/AuNPs‑硫代胆碱悬液滴于工作电极表面，印刷电极下放置一块磁铁，在外加磁场的作用下，Fe3O4/AuNPs‑硫代胆碱紧附于工作电极表面，再滴加50μL磷酸缓冲溶液，用线性扫描法进行电化学检测，在扫速为50mV/s，电位扫描范围0.2～1.2V条件下电化学进行检测；作为对照，未受对氧磷抑制的3nM乙酰胆碱酯酶与同样浓度的氯代乙酰硫代胆碱混合后反应，用上述同样的方式进行检测，抑制率和复活率按如下公式计算：I％＝(io‑it)/io×100％Ir％＝(ir‑it)/ir×100％R％＝(ir‑it)/(io‑it)×100％其中io和it分别来自未经过农药抑制和经过农药抑制后的乙酰胆碱酯酶和氯代乙酰硫代胆碱溶液反应的峰电流，ir为乙酰胆碱酯酶复活后测得的峰电流。