[发明专利]一种造血嵌合体实时定量PCR检测方法的PCR反应体系无效
| 申请号： | 201110362937.X | 申请日： | 2011-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN102443632A | 公开（公告）日： | 2012-05-09 |
| 发明（设计）人： | 虞强 | 申请（专利权）人： | 江苏迈健生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214000 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提出一种利用荧光染料SYBR green的来检测造血嵌合体的PCR实时定量检测方法中的PCR反应体系，所述反应体系利用荧光染料SYBR green和TaqMan进行定量PCR检测，每个反应20微升，在Rotor gene3000荧光定量PCR仪中进行，且在定量之前，先筛选适用于供体和受体的多态性标记。本发明中介绍了12个可以用于实时荧光定量来检测造血嵌合体的特异性多态性遗传标记；另外为了弥补荧光染料SYBR green纳入双链DNA的非特异性，同时运行熔解曲线来验证PCR产物的特异性。本发明的实时定量PCR方法所需费用便宜，保质期长，且灵敏度，为一种快捷简便而可靠的造血嵌合体的检测方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 造血 嵌合体 实时 定量 pcr 检测 方法 反应 体系 | ||
【主权项】：
一种利用荧光染料SYBR green来进行造血嵌合体的实时定量PCR检测方法的PCR反应体系，所述PCR检测方法包括以下步骤：S1.收集标本；S2.选择多态性遗传标记设计引物和探子(probe)；S3.实时定量PCR检测造血嵌合体；S4.人工合成12个不同稀释浓度的造血嵌合体；以及S5.统计学分析；其中，所述步骤S3实时定量PCR检测造血嵌合体的中，利用SYBRgreen和TaqMan的定量PCR，每个反应20微升，在Rotor gene3000荧光定量PCR仪中进行，所述PCR反应体系如下：样本DNA100ng，Sybr Green Mastermix 10μl，引物0.1μM，加MilliQ超纯水至终体积为20μl。
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