[发明专利]一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法

摘要

一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法，其步骤是：母株处理、浸泡消毒、清洗切段、诱导愈伤组织、愈伤组织碾碎、摇床培养、圆球茎培养、分化苗培养、小苗培养和大苗培养。本发明通过无性繁殖的方法使上一代的优良性状稳定遗传给下一代，有效避免了有性生殖所带来的子代性状分离现象，能最好的保留母株的性状，使得组培苗生产有目的性和针对性。

主权项

一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法，其特征是按如下步骤进行：（1）母株处理：选择目标铁皮石斛植株，用纯净水清洗干净，去除叶片，将植株外层鞘皮剥离干净；（2）浸泡消毒：在洁净室超净工作台上将植株放入浓度0.1%的升汞溶液中浸泡消毒15min；（3）清洗切段：消毒结束取出植株，用无菌水冲洗干净，用无菌手术刀将植株切为每段长2.0‑3.0cm的植株段；（4）诱导愈伤组织：将上述植株段接种在愈伤组织培养基上，在温度20‑28℃、湿度30%‑45%、光照度1800‑2000Lx和每天光照8‑12h的环境下进行培养45‑90天，直至愈伤组织长出为止；（5）愈伤组织碾碎：用无菌手术刀在超净工作台上将愈伤组织切下，用无菌镊子碾碎分散；（6）摇床培养：将碾碎的愈伤组织放入细胞培养液中置于摇床上常温培养15‑25天；（7）圆球茎培养：将细胞培养液中增殖出的细胞接种于圆球茎培养基上，在温度20‑28℃、湿度30%‑45%、光照度1800‑2000Lx和每天光照8‑12h的环境下进行培养45‑60天，直至圆球茎长出；（8）分化苗培养：将培养出的圆球茎，均匀接种在分化苗培养基上，在温度20‑28℃、湿度30%‑45%、光照度2000‑2200Lx和每天光照8‑12h的环境下进行培养40‑60天，直至分化苗长出；（9）小苗培养：将培养出的分化苗均匀接种在小苗培养基上，在温度20‑28℃、湿度30%‑45%、光照度2000‑2200Lx和每天光照8‑12h的环境下进行培养40‑60天，直至小苗长出；（10）大苗培养：将培养出的小苗均匀接种在大苗培养基上，在温度20‑28℃、湿度30%‑45%、光照度2000‑2500Lx和每天光照8‑12h的环境下培养50‑90天，瓶苗生根，至2‑4条根/株时，瓶苗出瓶炼苗。