[发明专利]一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法

摘要

本发明属于单倍体育种技术领域，公开了一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法。其主要技术特征为：种植、单倍体胚诱导、单倍体胚剥离、将小胚和大胚分别离体培养成单倍体苗、春化、染色体加倍、移栽和收获等步骤，大胚在大胚培养基中培养，小胚先经过小胚培养基培养，然后再进入基础培养基培养，小胚培养基具有较高的糖浓度、较高渗透压、较丰富氨基酸种类、较高维生素含量以及包含微量的生长调节因子，小胚萌发成苗率75%以上；离体培养的组培苗经低温春化后，直接进行染色体加倍并栽种，加倍处理效率89%以上，提高了单倍体胚成苗率、染色体加倍成活率和成功率，简化了小麦育种程序，提高了育种效率，缩短了育种周期，对加快培育优良品种具有明显成效。

主权项

1.一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法，其特征在于：该方法包括下列步骤：第一步，种植将小麦、玉米分期种植，花期相遇；第二步，单倍体诱导用新鲜玉米花粉为小麦柱头授粉，形成受精卵，通过激素诱导，形成小麦单倍体幼胚；第三步，单倍体胚的剥离小麦单倍体幼胚经14-20天发育后，在解剖镜下进行剥胚，并根据胚的大小将胚分成大胚和小胚两部分：直径大于400m的胚为大胚，直径小于等于400m的胚为小胚；第四步，将小胚和大胚分别离体培养成单倍体苗a、小胚离体培养将小胚置于小胚培养基中室温暗培养9-11天，有新芽萌动后，转到基础培养基中，在室温和14h光照条件下，分化出芽、根及分蘖，所述小胚培养基的配方为： 1/2MS基本培养基与 B5维生素、2,4-二氯苯氧乙酸 0.09-0.11mg/L、甘氨酸 1.9-2.1mg/L乳氨酸550-650mg/L糖45-55g/L、琼脂 6.5-7.5g/ L，且其pH值=5.8；所述基础培养基的配方为：1/2MS培养基，糖24-26g/L琼脂 6.5-7.5g/L，且其pH值=5.8；b、大胚离体培养将大胚接种在大胚培养基中培养7-20天，有新芽萌动后，在室温和14h光照条件下，分化出芽、根及分蘖，所述大胚培养基配方为：1/2MS培养基 6-苄基氨基嘌呤0.19-0.21 mg/L吲哚乙酸 0.19-0.21 mg/L 糖24-26g/L琼脂6.5-7.5g/L，且其pH值=5.8；第五步，春化和加倍待单倍体苗长到3叶或3个分蘖时，低温春化20-25天，室温缓苗2天，然后冲洗掉根部的培养基，将麦苗浸入由500 -750 mg/L的秋水仙素+20g/L的二甲基亚砜+0.5g/L的吐温-20组成的染色体加倍溶液，使分蘖节处于溶液液面下2.5cm-3.5 cm，在23-25℃加光照条件下处理6-8小时进行染色体加倍；第六步，移栽处理后的麦苗清水冲洗浸泡1天，移栽到温室或田间草炭土中，遮阴保湿缓苗半月后正常管理；第七步，收获小麦成熟后，收获获得双单倍体种子。