[发明专利]一种提取石斛总RNA的方法

摘要

本发明公开了一种提取石斛总RNA的方法，本发明先利用醋酸钾(pH4.8，5M)沉淀多糖，在较低的pH下，高浓度的K+有利于将多糖沉淀至下层，而RNA则保留在上层溶液，从而去除RNA中的部分多糖，并造成上层RNA液相中高浓度的K+，有利于随后氯仿抽提，进一步去除RNA中的多糖成分，经过以上两个步骤以后，RNA中的多糖成分可以被去除很大一部分，最后再通过LiCl沉淀可以得到较高质量和数量的RNA；本发明操作简单，提取成本低，重复性好，能获得高质量、高浓度的RNA。

主权项

一种提取石斛总RNA的方法，其特征在于所述的方法为：(1)将采集的新鲜石斛茎置于液氮中研磨成粉末，转入经焦碳酸二乙酯处理过的离心管中，加入含水饱和酚的RNA提取液中，混匀后剧烈振荡5～10min，再加入氯仿，振荡，抽提5～10min，室温下5000rpm离心15min，得上清液A；所述RNA提取液由如下组分组成：pH9.0的50mM Tris‑Cl，100mM NaCl，1％SDS；(2)取步骤(1)获得的上清液A加入pH为4.8的KAc溶液，KAc溶液的浓度为5mol/L，充分混匀，4℃放置15～30min，4℃下12000g离心20min，得上清液B；所述Kac溶液体积用量为上清液A体积的1/3；(3)取步骤(2)获得的上清液B，加入等体积氯仿，用力振荡，抽提5～10min，室温下5000rpm离心15min，取上清液，重复抽提3～5次，最终得上清液C；(4)取步骤(3)获得的上清液C，加1/3体积8M的LiCl，混匀，于4℃放置16h～20h沉淀RNA，然后4℃下10000rpm离心20min，得沉淀D；(5)取步骤(4)获得的沉淀D，用70％的乙醇洗涤后，吹干洗涤后的沉淀，用焦碳酸二乙酯处理重蒸馏水溶解吹干后的沉淀，获得所述石斛总RNA，在‑80℃中保存备用。