[发明专利]一种适用于多糖多酚植物组织高质量RNA快速提取方法

摘要

本发明公开了一种适用于多糖多酚植物组织的高质量RNA快速提取方法，具体步骤为：65℃预热裂解液，加入液氮粉碎后的植物组织，振荡混匀后加入氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提；加入沉淀液到上清，离心弃上清；加重悬液重悬沉淀，分别以水饱和酚(pH＜5.0)和氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提，离心取上清；加入无水乙醇沉淀，沉淀物以75％乙醇洗涤，风干，RNase free H2O溶解。本发明的有益效果在于：1、可从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中成功提取高质量RNA；2、操作时间短；3、无DNA污染。本发明中采用的裂解液主要成分为：CTAB、Tris-HCl、LiCl、EDTA、NaCl、PVP40；沉淀液的主要成分为：LICl；重悬液的主要成分为：NaCl。

主权项

一种适用于多糖多酚植物组织高质量RNA快速提取方法，其特征在于使用裂解液、沉淀液、重悬液按裂解‑抽提‑沉淀‑重悬‑抽提‑沉淀流程提取RNA；具体步骤如下：(1)取多糖多酚植物组织于液氮中粉碎；(2)在2mL离心管加入1.2mL 65℃预热的裂解液，加入液氮粉碎后的植物组织，振荡混匀；(3)加入600μL的氯仿和异戊醇的混合液，氯仿和异戊醇的体积比为24∶1，振荡混匀，4℃下，8000r/min，离心15min；(4)取上清，加入400μL沉淀液，混匀，‑20℃沉淀0.5～2小时后，4℃以下，12000r/min，离心15min；(5)弃上清，以500μL重悬液沉淀，加入500μL冰冷的水饱和酚(PH＜5.0)，振荡混匀后冰上放置10min，4℃以下，12000r/min，离心15min；(6)取上清，加入500μL氯仿与异戊醇的混合液，振荡混匀后冰浴10min，4℃以下，12000r/min，离心15min；(7)取上清，加入1mL无水乙醇，冰上沉淀30min，4℃以下，12000r/min，离心15min；(8)沉淀物以75％乙醇洗涤2次，风干，RNase free H2O溶解。