[发明专利]青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法

摘要

一种青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法，它主要包括如下步骤：1）植物体的选择及无菌处理：选择3～7月及9～11月间的健康的青钱柳植株，取当年生嫩枝及嫩叶进行清洗，洗涤剂浸泡5-20min，清水冲洗0.5～2h；无菌条件下将清洗后70%～80%酒精消毒5-30s，再利用0.1%的升汞灭菌5～20min或2%-12%次氯酸钠灭菌5～20min；2）愈伤组织诱导培养；3）愈伤组织颗粒悬浮培养；4）愈伤组织扩大培养；本发明能够大大提高青钱柳愈伤组织的生长速率，在相同时间内，固体培养基上愈伤组织上增长量达到721%时，液体悬浮培养愈伤组织增长量达到1292%；通过对α-葡萄糖苷酶活性抑制的实验可知，液体悬浮培养过程中，次生代谢产物被分泌到胞外，愈伤组织细胞内及培养液内均含有α-葡萄糖苷酶活性抑制剂。

主权项

一种青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法，其特征在于它主要包括如下步骤：1）植物体的选择及无菌处理：选择3～7月及9～11月间的健康的青钱柳植株，取当年生嫩枝及嫩叶进行清洗，洗涤剂浸泡5‑20min，清水冲洗0.5～2h；无菌条件下将清洗后70%～80%酒精消毒5‑30s，再利用0.1%的升汞灭菌5～20min或2%‑12%次氯酸钠灭菌5～20min；2）愈伤组织诱导培养：将灭菌的愈伤组织接种到诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养；基本培养基为MS培养基，在培养基中加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6‑BA,20～30g/L的蔗糖，4‑7g琼酯，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～25天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux；3）愈伤组织颗粒悬浮培养：选取生长健康，代谢旺盛，结构疏松的愈伤组织，接种至装有200ml液体培养基的锥形瓶中震荡培养；培养基为：MS基本培养基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6‑BA,20～30g/L的蔗糖，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～20天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux，转速：50～200r/min；4）愈伤组织扩大培养：待愈伤组织处于对数生长期时，选取悬浮培养体系内均匀分散生长旺盛的愈伤组织颗粒接种至5L发酵罐中，剔除瓶底老化褐变的愈伤组织团块，用发酵罐进行扩大培养；培养基为：MS基本培养基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6‑BA,20～30g/L的蔗糖，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～20天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux，转速：50～200r/min。