[发明专利]培养肝脏干细胞的方法无效
| 申请号： | 201110378651.0 | 申请日： | 2011-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN102399744A | 公开（公告）日： | 2012-04-04 |
| 发明（设计）人： | 毕薇薇 | 申请（专利权）人： | 吉林省拓华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100 | 代理人： | 王淳 |
| 地址： | 136000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种培养肝脏干细胞的方法，其步骤如下：a.在无菌条件下，取肝脏组织，用含有双抗的PBS冲洗3遍；b.将肝脏组织剪碎，用0.25％g/mL的胰蛋白酶溶液，消化30分钟；c.用完全培养基中和消化液；d.将经过消化和中和后的肝脏组织在消化液和中和液的混合液体中吹打混匀，以500转/分钟离心5分钟，取上层清液，之后再以1500转/分钟离心5分钟；e.弃去上层清液，将沉淀用完全培养基悬起，接种于培养瓶中，在37℃下、5％CO2的环境中培养；f.培养4天后，洗去未贴壁的细胞，用完全培养基进行换液；g.每隔4天用完全培养基换一次液，待细胞生长扩增达到占培养瓶底面积80％以上，1∶2传代。 | ||
| 搜索关键词： | 培养 肝脏 干细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种培养肝脏干细胞的方法，其特征在于，步骤如下：a.在无菌条件下，取肝脏组织，用含有双抗的PBS冲洗3遍；b.将肝脏组织剪碎，用0.25％g/mL的胰蛋白酶溶液，消化30分钟；c.用完全培养基中和消化液；d.将经过步骤b消化和步骤c中和后的肝脏组织在消化液和中和液的混合液体中吹打混匀，以500转/分钟离心5分钟，取上层清液，之后再以1500转/分钟离心5分钟；e.弃去上层清液，将沉淀用完全培养基悬起，接种于培养瓶中，在37℃下、5％CO2的环境中培养；f.培养4天后，洗去未贴壁的细胞，用完全培养基进行换液；g.每隔4天用完全培养基换一次液，待细胞生长扩增达到占培养瓶底面积80％以上，1∶2传代。
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