[发明专利]人脑组织特异性基因LRRC4单抗及其制备和应用方法

摘要

本发明涉及人脑组织特异性基因LRRC4单抗及其制备和应用方法。本发明选取LRRC4全长蛋白中亲水性好、抗原指数高且序列特异的一段多肽作为动物免疫原。应用多聚酶链式反应克隆编码该多肽的核苷酸序列，构建包含该核苷酸序列的His融合表达载体，然后诱导His融合蛋白表达，经纯化后免疫Balb/c小鼠，分离其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。融合细胞经阳性克隆筛选及亚克隆化后用以制备腹水并纯化获得抗LRRC4单抗。LRRC4在正常人脑组织中特异性高表达而在胶质瘤中表达下调，抗LRRC4单抗的制备将为深入研究LRRC4的生物学功能提供有利工具，以期为胶质瘤的诊断和治疗提供新的思路与方法。

主权项

人脑组织特异性基因LRRC4单抗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：选取LRRC4全长蛋白第460‑521位，长度为62个氨基酸的多肽，序列为ETTEISPEDTTRKYKPVPTTSTGYQPAYTTSTTVLIQTTRVPKQVAVPATDTTDKMQTSLDE，作为动物的免疫原；应用多聚酶链式反应克隆编码该多肽的核苷酸序列，构建包含该核苷酸序列的His融合表达载体，转入大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导His融合蛋白表达，Ni柱亲和纯化后免疫Balb/c小鼠，然后分离其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，经阳性克隆筛选及亚克隆化后制备腹水，辛酸‑硫酸铵沉淀法纯化获得抗LRRC4单抗。