[发明专利]构建血红铆钉菇子实体周围土壤真菌群落ITS文库的方法

摘要

本发明公开了一种构建血红铆钉菇子实体周围土壤真菌群落ITS文库的方法。本发明方法包括如下步骤：提取血红铆钉菇子实体周围土壤的宏基因组；以宏基因组为模板用ITS1和ITS4进行PCR扩增回收700bp的DNA片段；将每个DNA片段与pMD19-T载体连接，用RV-M和M13-47进行PCR扩增，分别用HinfI、Hae III、Msp I、Taq I和Mbo I酶切各PCR产物并电泳，得到分子图谱。应用本发明的方法可以构建得到血红铆钉菇子实体周围土壤真菌群落ITS文库，对于明确血红铆钉菇子实体生长环境微生物真菌群落结构、遗传、功能多样性具有重要的意义，为深入探讨其在血红铆钉菇的人工驯化培养提供重要信息，具有重要的应用价值。

主权项

一种构建血红铆钉菇子实体周围土壤真菌群落的分子图谱的方法，包括如下步骤：(1)取血红铆钉菇子实体周围土壤，作为土壤样本提取宏基因组DNA；(2)以所述宏基因组DNA为模板，用上游引物ITS1和下游引物ITS4组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物，即为DNA片段库；所述上游引物ITS1为序列表的序列1所示的DNA片段；所述下游引物ITS4为序列表的序列2所示的DNA片段；(3)将所述DNA片段库与pMD19‑T载体连接，得到重组质粒库；(4)分别以所述重组质粒库中的每个重组质粒为模板，用上游引物RV‑M和下游引物M13‑47组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物；将各个PCR扩增产物分别用限制性内切酶Hinf I、Hae III、Msp I、Taq I和Mbo I进行酶切并电泳，得到分子图谱；所述上游引物RV‑M为序列表的序列3所示的DNA片段；所述下游引物M13‑47为序列表的序列4所示的DNA片段。