[发明专利]一种改良的人血中抗体的检测技术

摘要

一种改良的人血中抗体的检测技术，属于检测技术领域，由以下步骤完成，特异多肽抗原及内参多肽抗原的设计与合成，本发明提供一种与人类蛋白组无免疫交叉反应的羊多肽序列为内参多肽抗原；特异和内参多肽抗原的溶解和包被；血清或血浆中抗体的孵育；酶标抗体的孵育；显色，获得特异结合指数SBI。本发明有效提高了人血抗体检测方法的准确度和可重复性和特异性。

主权项

一种改良的人血中抗体的检测技术，其特征是由以下步骤完成：(1)多肽抗原的设计与合成：①特异多肽抗原的合成：根据所选蛋白的核心表位，设计并合成特异多肽抗原；②内参多肽抗原的合成：本发明提供一种与人类蛋白组无免疫交叉反应的羊多肽序列：H‑VFQKLKDLKDYGGVSLPEWVCIAFHTSG‑OH，为内参多肽抗原；(2)特异和内参多肽抗原的溶解：将中性及碱性多肽抗原溶解于67％乙酸中，浓度5mg/ml，作为储备液，分装后置于‑20℃冰箱保存；(3)特异和内参多肽抗原的包被：①特异多肽抗原包被：包被液稀释特异多肽抗原至所需浓度，每孔加100μl多肽抗原包被液，3复孔重复，覆封板膜，4℃静置过夜；②内参多肽抗原包被：包被液将内参多肽抗原稀释至10‑20μg/ml浓度，每孔加100μl，对应特异多肽抗原3复孔重复；其中特异多肽抗原包被浓度应以质控血样的特异结合指数为参照标准，质控血样的特异结合指数参照标准范围在1‑1.4之间；所述的包被液配方为：叠氮钠NaN3 0.1g，加PBS缓冲液至100ml；(4)血清或血浆中抗体的孵育：弃去包被液，洗板机或手动洗涤3‑6次，每孔加入100μl  1∶100‑500倍分析液稀释的血清或血浆，37℃或室温孵育1‑4小时，其中分析液配方为：牛血清白蛋白(BSA)1.0g，加PBS缓冲液至100ml；(5)酶标抗体的孵育：弃去孵育的血清或血浆，洗板机或手动洗涤3‑6次，每孔加入100‑200μl，1/10000‑30000分析液稀释的酶标抗体，37℃或室温孵育1‑4小时，其中分析液是步骤4采用的分析液；(6)显色：与目前方法一致，以450nm为测试波长，630nm为参考波长，测定酶标板每孔OD值，得到特异多肽抗原OD值、对应特异多肽抗原阴性对照OD值、内参多肽抗原OD值和对应内参多肽抗原阴性对照OD值；(7)特异结合指数SBI的计算公式如下：SBI＝特异多肽抗原OD值‑对应特异多肽抗原阴性对照OD值/内参多肽抗原OD值‑对应内参多肽抗原阴性对照OD值。