[发明专利]利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法无效
| 申请号： | 201110393988.9 | 申请日： | 2011-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN102443596A | 公开（公告）日： | 2012-05-09 |
| 发明（设计）人： | 刘斌;李宏宇;林辰涛 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院作物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;王加岭 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法，其是向含有线性载体和目的DNA片段的体系中加入具有3’-5’外切酶活性的核酸外切酶，在冰上消化30sec～3min，使两者产生具有同源序列的5’末端，然后在70～75℃下使酶失活，最后退火使线性载体和目的DNA片段重组形成带有缺刻的环形质粒，并转化到大肠杆菌中修复缺刻并随宿主基因组进行复制。本发明通过使酶热失活而终止消化反应，操作简单易行，同时也继承了其它LIC系统阳性率高的优势，因此适用于大规模的基因克隆及载体构建。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 核酸外切酶 外切 活性 克隆 目的 dna 方法 | ||
【主权项】：
一种利用核酸外切酶的3’‑5’外切酶活性克隆目的DNA的方法，其特征在于，向含有线性载体和目的DNA片段的体系中加入具有3’‑5’外切酶活性的核酸外切酶，在冰上消化30sec～3min，使两者产生具有同源序列的5’末端，然后在70～75℃下使酶失活，最后退火使线性载体和目的DNA片段重组形成带有缺刻的环形质粒，并转化到大肠杆菌中修复缺刻并随宿主基因组进行复制。
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