[发明专利]一种提取梨花粉管细胞核的方法

摘要

本发明公开了一种提取梨花粉管细胞核的方法，包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养；3)细胞核的释放：单细胞筛研磨和双细胞筛过滤释放细胞核；4)细胞核纯化：采用Percoll密度梯度离心；5)清洗Percoll。该方法不涉及酶解提取原生质体，及传统研磨过滤技术。该方法具有操作简便、快捷、成本低、提纯效果明显等优点。提纯后的细胞核几乎没有细胞质部分污染，不仅可以应用DNA纤维制备，还可以应用于细胞核蛋白质组学研究，对于研究梨花粉管生长代谢及自交不亲和反应具有重要的意义。

主权项

一种提取梨花粉管细胞核的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：1)采集花粉：采集大蕾期花药，干燥；2)花粉培养：分离干燥花药中的花粉，将其加入到花粉培养基中，避光条件下，25～28℃，140～180rpm，培养3～4h；3)细胞核的释放：将培养好的花粉连同培养基倒入孔径为50μm的细胞筛a内，并使培养基通过细胞筛流出，迅速在细胞筛a底部加一个孔径为40μm的细胞筛b，将两个细胞筛放置于比其直径稍大的培养皿上，迅速将细胞核研磨液加入到细胞筛a中，用玻璃研棒以60～100rpm速度研磨，同时再次添加细胞核研磨液使释放的细胞核不断流出经细胞筛b过滤到培养皿中，以上操作均在4℃下进行；4)细胞核纯化：将步骤3)所述培养皿中得到的液体加入到离心管中，在漩涡仪上微震动20～40秒，迅速离心(200g，4℃，5min)得上清即为粗细胞核；将上清液转移到Percoll密度梯度工作液顶部离心(3500g，4℃，25min)；离心后，Percoll密度梯度工作液顶部为淡黄色的细胞质，底部沉淀为纯化的细胞核；5)Percoll的去除：将纯化的细胞核悬浮于细胞核研磨液进行洗涤，并迅速离心(3500g，4℃，25min)；沉淀即为纯化后去除Percoll的梨花粉管细胞核，用研磨液悬浮备用。