[发明专利]用模式生物斑马鱼筛选诱导心肌细胞形成的药物的方法无效

专利信息
申请号: 201110403099.6 申请日: 2011-12-07
公开(公告)号: CN102520130A 公开(公告)日: 2012-06-27
发明(设计)人: 钟涛 申请(专利权)人: 复旦大学
主分类号: G01N33/15 分类号: G01N33/15;C12Q1/02
代理公司: 上海正旦专利代理有限公司 31200 代理人: 陆飞;盛志范
地址: 200433 *** 国省代码: 上海;31
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摘要: 发明属于医药技术领域,具体为用模式生物斑马鱼筛选诱导心肌细胞形成的药物的方法。本发明首先将25-30对Tg(cmlc2:EGFP)转基因斑马鱼纯合体进行交配获得胚胎,然后将胚胎转移到培养板中,每孔中加入适量已发育至50%外包期的斑马鱼胚胎,用含有1-30µM小分子化合物的胚胎培养液放置于培养箱进行培养;然后对胚胎心脏大小、心脏形态和心肌细胞数目进行仔细检查;此外,还检查胚胎的整体形态(比如背腹体轴和前后体轴等)及其它器官形成是否受到影响。最后通过这些实验结果来初步判定这些小分子化合物是否促进心肌细胞的形成而不影响其它器官的发育。通过这种方法所筛选出来的新药特异性强,毒副作用低。
搜索关键词: 模式 生物 斑马 筛选 诱导 心肌 细胞 形成 药物 方法
【主权项】:
一种用模式生物斑马鱼筛选诱导心肌细胞形成的药物的方法,其特征在于,具体步骤为:(1)、对从药物库中取出的各种不同结构的小分子化合物,用二甲亚砜作为助溶剂,配成1mM的储存液;在表型筛选时,将每种化合物用胚胎培养液稀释成1‑30µM ;(2)、使心脏转基因斑马鱼Tg(cmlc2:EGFP)纯合体进行交配,获得胚胎,培养至50%外包期;然后将胚胎转移至培养板中,每孔置入适量胚胎,同时加入不同小分子化合物的胚胎培养液,在20‑30℃胚胎培养箱进行培养;其中,二甲亚砜作为空白对照组;在胚胎发育的不同阶段,对胚胎心脏大小和心脏形态进行仔细的检查,并且通过细胞核标记的转基因斑马鱼Tg(cmlc2:DsRed‑nuc)进行心肌细胞计数;最后对实验结果进行初步判定,分析各个小分子化合物对心肌细胞形成的影响;(3)、检查胚胎的整体形态,及其它器官包括大脑,眼睛,脊索和体节等是否受到影响;通过观察结果分析判定各个小分子化合物是否对胚胎其它器官有毒性作用。
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