[发明专利]一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法无效
| 申请号： | 201110403792.3 | 申请日： | 2011-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN102559752A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 彭辉;张涌;常博皞 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学;杨凌科元克隆股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/87 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 陆万寿 |
| 地址： | 712100 陕西省西安*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法，包括以下步骤：1)配制待转染的电穿孔溶液；2)对胚胎透明带进行弱化处理；3)将胚胎移入配制好的含电穿孔溶液，室温静置，然后再将胚胎连同电穿孔溶液移入电转槽中进行电穿孔。由于采用了电穿孔转染的方法，本发明还能同时将两种或多种质粒DNA，或者反义寡核苷酸一起转入附植前胚胎，如果构建的质粒DNA所携带的外源片段是某个关键基因或靶向某个关键基因的干扰片段，则可具体研究某个关键基因在小鼠附植前胚胎的发育过程中所起的具体作用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 质粒 dna 反义 寡核苷酸 转染 附植前 胚胎 方法 | ||
【主权项】：
一种质粒DNA或反义寡核苷酸转染附植前胚胎的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待转染的质粒DNA用电转缓冲液稀释至浓度为10～80μg/ml，得到质粒DNA电穿孔溶液；或者将待转染的反义寡核苷酸用电转缓冲液稀释至浓度为0.2mM，得到反义寡核苷酸电穿孔溶液；2)将待转染的附植前胚胎置于酸性台氏液中，室温孵育10～20s，然后终止消化并清洗；3)将质粒DNA电穿孔溶液或反义寡核苷酸电穿孔溶液加入电转皿两根电极之间的凹槽中，将附植前胚胎线性排列在电转皿的两根电极之间，在脉冲电场下，利用电穿孔法对附植前胚胎进行转染。
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