[发明专利]一种人气道上皮细胞的培养方法无效
| 申请号： | 201110416809.9 | 申请日： | 2011-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN102433296A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 卢文菊;何建行;王健;钟南山;张晨婷;徐小明;陈豫钦;巩雪芳 | 申请（专利权）人： | 广州医学院第一附属医院;呼吸疾病国家重点实验室 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华;马赟斋 |
| 地址： | 510120 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人气道上皮细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)获取原代培养的人气道上皮细胞；(2)获取传代培养的人气道上皮细胞：当原代细胞达到70～90％融合密度后，用磷酸缓冲液溶液清洗，加入0.25％胰蛋白酶溶液，室温消化5～10分钟，当细胞出现回缩、悬浮时，收集细胞悬浮液，加入含有蛋白酶抑制剂的等量溶液，离心收集细胞，然后以1～6×106细胞/ml的浓度接种于新的含完全培养基的培养皿中进行培养，3～5天细胞生长至对数生长期，获得传代培养的人气道上皮细胞。本发明的培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞纯度高，形态均一，生长良好，且可以连续传代。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 人气 上皮细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种人气道上皮细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获取原代培养的人气道上皮细胞：取离体人气管或支气管，用消化培养基在4℃消化24～48h后收集气道上皮细胞，然后接种至培养皿中，用完全培养基进行原代细胞培养，获得原代培养的人气道上皮细胞；(2)获取传代培养的人气道上皮细胞：当原代细胞达到70～90％融合密度后，用磷酸缓冲液溶液清洗，加入0.25％胰蛋白酶溶液，室温消化5～10分钟，当细胞出现回缩、悬浮时，收集细胞悬浮液，加入含有蛋白酶抑制剂的等量溶液，离心收集细胞，然后以1～6×106细胞/ml的浓度接种于新的含完全培养基的培养皿中进行培养，3～5天细胞生长至对数生长期，获得传代培养的人气道上皮细胞。
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