[发明专利]一种检测环境水样中邻苯二甲酸二环己酯的方法

摘要

本发明公开了一种检测环境水样中邻苯二甲酸二环己酯的方法，包括以下步骤：a：标准曲线的建立步骤、b：样品的检测步骤。本发明与现有技术相比，不仅具有邻苯二甲酸二环己酯抗原抗体的选择性，而且酶促反应可以放大测定信号，提高灵敏度，同时辣根过氧化物酶在市场中很普遍，价廉适合推广。所以如此简单、快速、成本低、特异性强等优点的分析方法在适合环境中邻苯二甲酸二环己酯污染物的微量监测提供了便利。

主权项

一种检测环境水样中邻苯二甲酸二环己酯的方法，包括以下步骤：a：标准曲线的建立步骤：在建立邻苯二甲酸二环己酯的标准曲线之前，先配制不同浓度的标准品。邻苯二甲酸二环己酯标准液用1‑2mL的无水乙醇溶解后，再用比例为1∶6～9的稀释液与无水乙醇混合液稀释一系列的浓度，分别为20ng/mL、10ng/mL、8ng/mL、4ng/mL、2ng/mL、1ng/mL、0.8ng/mL、0.4ng/mL、0.2ng/mL、0.1ng/mL、0.025ng/mL、0.0125ng/mL；竞争时加入这一系列浓度的标准液，测定结果的平均值经过数据处理后绘制成标准曲线；(1)包被步骤：用浓度为7μg/mL的邻苯二甲酸二环己酯包被抗原包被96孔酶标板，每孔100μL，放置培养箱37℃温育2h后，取出酶标板，将孔内溶液倒掉，每一次加满洗涤液，静置3‑5min，再将其甩干，总共三次；(2)封闭步骤：在包被好的酶标准版中加入1％卵清蛋白溶液，每孔150μL，37℃温育30min后，取出同上洗涤3次；(3)竞争步骤：每孔加入50μL邻苯二甲酸二环己酯标准溶液和50μL酶标记的邻苯二甲酸二环己酯抗体，37℃下温育3h后，然后同上洗涤；(4)检测步骤：加入底物液，并与酶发生反应显示颜色，每孔100μL，37℃下温育30min后，用2mol/L硫酸溶液的终止液停止反应；用多功能酶标仪测定各孔在490nm时的吸光强度；b：样品的检测步骤除(3)竞争步骤：每孔加入50μL不同水样样品和50μL邻苯二甲酸二环己酯的酶标抗体，37℃下温育3h后，然后洗涤，其余与a：标准曲线的建立步骤相 同。