[发明专利]一种将穿梭质粒导入嗜醋酸棒杆菌的电转化方法无效
| 申请号： | 201110421135.1 | 申请日： | 2011-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN103160535A | 公开（公告）日： | 2013-06-19 |
| 发明（设计）人： | 张震宇;刘合栋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/77 | 分类号： | C12N15/77;C12N1/21;C12R1/15 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种将穿梭质粒导入嗜醋酸棒杆菌的电转化方法，主要用于将大肠杆菌和嗜醋酸棒杆菌中穿梭表达的重组质粒快速有效地电转化导入嗜醋酸棒杆菌中。通过控制培养基的组成、细胞培养时间、氨苄青霉素处理时间和加入量、质粒的甲基化、热击时间和热击温度、电击条件来制备高效电转化感受态细胞，减弱嗜醋酸棒杆菌细胞壁对穿梭质粒的阻碍作用，并减少嗜醋酸棒杆菌对穿梭质粒的限制性酶切作用，使得穿梭质粒能够通过电转化方法高效地导入到嗜醋酸棒杆菌中，电转化效率可达到6.4×104cfu/μg DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 穿梭 质粒 导入 醋酸 杆菌 转化 方法 | ||
【主权项】：
本发明涉及一种制备高效感受态细胞的方法，使得大肠杆菌和嗜醋酸棒杆菌中穿梭表达的重组质粒能快速有效地电转化导入嗜醋酸棒杆菌中。本发明通过控制培养基的组成、细胞培养时间、氨苄青霉素处理时间和加入量、质粒的甲基化、热击时间利热击温度、电击条件来制备高效电转化感受态细胞，减弱嗜醋酸棒杆菌细胞壁对穿梭质粒的阻碍作用，并减少嗜醋酸棒杆菌对穿梭质粒的限制性酶切作用，使得穿梭质粒能够通过电转化方法高效地导入到嗜醋酸棒杆菌中，电转化效率达到6.4×104cfu/μgDNA。1.一种能在大肠杆菌和嗜醋酸棒杆菌中穿梭表达的重组质粒电转化导入到嗜酸棒杆菌的快速有效的方法，其特征在于：利用大肠杆菌SCS110大量扩增重组质粒，并用专用培养基和氨苄青霉素对嗜醋酸棒杆菌进行前培养，破坏细胞壁结构，电击时加入电击缓冲液以及电击后热激处理。
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