[发明专利]一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法

摘要

本发明涉及一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法，包括：首先获得高质量的鲤鱼BMP4抗体，其次，成功提取雄鲤鱼背部肌肉、腹部肌肉、尾部肌肉蛋白；然后用已检测的鲤鱼BMP4抗体对目标鲤鱼的这些肌肉组织中的BMP4蛋白进行检测，用GAPDH做目标蛋白的对照，如果能检测到55KD的蛋白，则为雄性鲤鱼背部肌肉，如果检测不到，则为雄性鲤鱼其它部位肌肉。本发明的有益效果为：可从雄性鲤鱼背部肌肉、腹部肌肉、尾部肌肉中鉴别出背部肌肉，可为胸肌区别与其它肌肉提供研究的突破口，同时可根据这个分子标记探寻用于雄性鲤背部肌肉进行选育的路径和方法。

主权项

一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）提取雄鲤总RNA，用反转录试剂盒把RNA反转录成cDNA；2）获得鲤鱼BMP4基因cDNA序列：根据斑马鱼BMP4基因序列Genbank 登录号AF402958设计引物序列：上游引物为：F：5’‑ gatacccgaggaagggaaga‑3’；下游引物为：R：5’‑ ggggtgtggctgccgctaaa ‑3’；获得鲤鱼的BMP4的cDNA，并根据上述cDNA对应氨基酸序列设计多肽，合成多肽，并对多肽进行修饰获得鲤鱼BMP4多肽，其氨基酸序列为：QVLLGESSYASLIPEEGKc，其中c为增加的cys，用于多肽偶联；3）用鲤鱼BMP4多肽免疫新西兰大白兔，制备兔抗BMP4血清；4）用BMP4多肽对兔血清进行抗原亲和纯化，纯化后获得鲤鱼BMP4多克隆抗体，抗体进行ELISA效价检测，结果显示，ELISA Titer大于1:128000；5）用鲤鱼BMP4多克隆抗体western技术检测雄鲤鱼背部、腹部和尾部肌肉中BMP4基因的表达，结果显示雄性鲤鱼背部肌肉中有BMP4蛋白的表达，而在其它肌肉中没有检测到BMP4蛋白的表达，这样就可以从雄性鲤鱼肉中鉴别出背部肌肉。