[发明专利]一种鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价的测定方法

摘要

一种鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价的测定方法，它包括以下步骤：⑴制备鸡胚成纤维细胞悬液；⑵细胞培养；⑶稀释待测定的病毒液；⑷病毒接种及培养；⑸蚀斑计数；⑹毒价计算。本发明操作简单，测定条件均一，可控性强，批间误差小，缩短了鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价的测定周期。

主权项

一种鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价的测定方法，其特征是，它包括以下步骤：⑴ 制备鸡胚成纤维细胞悬液：使用胰酶连续消化法将9日龄SPF鸡胚制成鸡胚成纤维细胞悬液；⑵ 细胞培养：用细胞生长液将鸡胚成纤维细胞悬液稀释成细胞密度0.9×106个/ml ~ 1.1×106个/ml，接种于细胞培养板中，每孔加入1ml细胞悬液，置CO2培养箱中培养，至长满细胞单层，备用； ⑶ 稀释病毒液：采用旋涡混悬器混匀方法，用细胞维持液1×104、5×104倍稀释待测定的病毒液，得到梯度浓度的病毒液；⑷ 病毒接种及培养：弃去步骤⑵细胞培养板中细胞生长液，并按0.2ml/孔加入步骤⑶所得稀释病毒液，每个稀释度接5个孔，置CO2培养箱中吸附1h，接毒孔再加入细胞维持液1.5ml/孔；同时将细胞培养板未接毒孔中加入细胞维持液，1.5ml/孔，每个稀释度对应1孔，设置为阴性对照；细胞培养板置CO2培养箱中培养；⑸ 蚀斑计数：病毒接种后培养4~5天，待病毒蚀斑充分生长时，在倒置显微镜下对细胞培养板中相应的蚀斑进行计数；⑹ 毒价计算：阴性对照培养孔无蚀斑出现的细胞培养板为有效板，根据有效板的各培养孔的蚀斑数、接种的待测定的病毒液的用量及稀释倍数计算出待测定的病毒液的毒价。