[发明专利]分离及培养大胚龄人神经干细胞原代细胞的方法

摘要

本发明提出一种分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其应用于大胚龄人神经干细胞的培养过程，所述神经干细胞培养过程的步骤包括：原代细胞的分离及培养；神经干细胞的传代培养；单细胞定点动态观察克隆形成；诱导分化培养；以及免疫荧光法检测。本发明的高低密度法分离培养大胚龄人神经干细胞的方法，先采用高密度，后降低密度的原代细胞悬浮培养法，可以快速形成克隆球，克隆球开始形成时间比维持低密度培养明显提前，并且生长迅速。而一旦进入有丝分裂期形成克隆球，则必须及时降低密度，以避免高密度的抑制作用。

主权项

一种分离及培养大胚龄人神经干细胞的原代细胞的方法，其包括如下步骤：取大胚龄水囊引产的新无菌条件下分离出大脑皮层组织，剥除脑分成小块后在PBS液中漂洗三次洗去血细胞，用细吸管轻柔吹打至组织碎块完全散开，离心洗涤后吹打制成悬液；使用200目尼龙滤网过滤，制成单细胞悬液，无血清培养基，台盼蓝染色计数活细胞，调整细胞浓度为1×107/ml；以及将原代细胞短暂贴壁2次去除成纤维细胞，分别种植于未包被的培养瓶，37℃，5％CO2条件下静置培养。