[发明专利]一种可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌及其构建无效
| 申请号： | 201110453684.7 | 申请日： | 2011-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN102433293A | 公开（公告）日： | 2012-05-02 |
| 发明（设计）人： | 李爽;王菊芳;杨晓锋;王小宁;于平儒 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12P7/56;C12R1/01;C12R1/145 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘晖;李卫东 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌及其构建方法与应用，该工程菌由以下步骤构建得到：合成卡那抗性基因，并将其插入到大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中；扩增乙酸激酶编码基因的某一段序列，为pta-up序列；再将pta-up序列插入到大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中，构建得到自杀载体1；扩增磷酸转乙酰酶编码基因的某一段序列，为ack-down序列；再将ack-down序列插入到自杀载体1中，获得自杀载体pPuKAd；将自杀载体pPuKAd转化入嗜热厌氧杆菌，并经抗性筛选后得到可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌。用本发明的工程菌进行乳酸的发酵生产，不产生乙酸，碳代谢流进行了重新分配，促进了目标产物L-乳酸的大量积累，所得L-乳酸的光学纯度达99.5％以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 发酵 生产 光学 乳酸 工程 及其 构建 | ||
【主权项】：
一种可利用木糖发酵生产光学纯L‑乳酸的工程菌，其特征在于是由以下步骤构建得到：(1)合成卡那抗性基因，并将其插入到大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中；(2)PCR扩增乙酸激酶编码基因的某一段序列，为pta‑up序列；再将pta‑up序列插入到步骤(1)的已插入卡那抗性基因的大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中，构建得到自杀载体1；(3)PCR扩增磷酸转乙酰酶编码基因的某一段序列，为ack‑down序列；再将ack‑down序列插入到自杀载体1中，获得自杀载体pPuKAd；(4)将自杀载体pPuKAd转化入嗜热厌氧杆菌，并经抗性筛选后得到可利用木糖发酵生产光学纯L‑乳酸的工程菌。
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