[发明专利]油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法

摘要

本发明公开了一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，涉及分子生物学实验中植物基因组DNA分离提取技术。本方法主要包括预处理叶片组织样、细胞的破碎、非DNA成分的抽提、DNA的析出、离子的去除和组织样品的循环提取。本发明使用洗液预处理油桐成熟叶片和老叶片组织样一次，能有效地去除叶片内富含的多酚、多糖等次生代谢产物；本发明对叶片组织样进行循环提取，该步骤在传统基因组DNA提取方法中是不存在的，本发明方法1份组织样可进行4次基因组DNA提取，使基因组DNA产量显著提高；本发明能从长期低温储存的成熟叶片和老叶片中提取到高质量高产量的基因组DNA。本发明适用于油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA的提取。

主权项

一种油桐成熟叶片和老叶片基因组DNA提取方法，其特征在于包括下列步骤：①将叶片组织样品在液氮速冻下磨成细粉后，取0.3g转入2mL离心管中，加入1.5mL洗液，充分混匀后，冰中静止15min，12000rpm离心弃上清液；②弃掉洗液后，加入500μl预热的3％CTAB提取液，充分混匀，65℃水浴40min；③12000rpm常温离心15min，转移上清液到新的1.5mL离心管中，加入100μl的24∶1的氯仿‑异戊醇，充分混匀后，常温12000rpm离心15min，抽提1～2次，抽提后的上清液转入新的离心管中，加入两倍体积的提前预冷到‑20℃的100％酒精；放置于‑20℃冰柜30min，让DNA沉淀充分析出，将析出的DNA沉淀转移到含有1mL 70％酒精的1.5mL离心管中，漂洗1～2次，每次30min，倒干酒精，待DNA沉淀干燥后，用100μl的T0.1E充分溶解，并用1μl浓度为10μg/mLRNA酶37℃消化30min，该过程得到的DNA样品，称为1stDNA；④对步骤③中转移上清液后离心管底部的组织样品，继续加入500μl的3％CTAB提取液进行提取，该组织样共循环提取4次，依此又得到3批次DNA样品，分别称为2ndDNA、3rdDNA和4thDNA。