[发明专利]抗体的快速人源化

摘要

本发明提供了用于在哺乳动物细胞中产生人源化全长抗体的方法。提供了具有验证的高度框架多样性的人源化变体的文库，而不需要回复突变来保持初始亲和性。将源自模板抗体的合成CDR编码片段文库连接于来自人框架集合(pool)的人框架区编码片段，所述人框架集合仅限于来自功能表达抗体的种系序列。载体包含编码HC框架区4的核酸序列。不需要CDR移植或噬菌体展示。

主权项

一种生产人源化抗体[[与模板抗体相比，其表现出相等或更高的对抗原的亲和性]]的方法，所述方法包括：(a)合成包含互补性决定区(CDR)片段编码文库和框架(FW)片段编码文库的免疫球蛋白重链(HC)双链DNA片段文库，其中至少一个CDR片段文库源自所述模板抗体，并且每个FW片段文库[[源]]自从功能表达的人抗体获得的人框架集合[[限于序列]]；(b)合成包含CDR片段编码文库和FW片段编码文库的免疫球蛋白轻链(LC)双链DNA片段文库，其中至少一个CDR片段文库源自所述模板抗体，并且每个FW片段文库[[源]]自从功能表达的人抗体获得的人框架集合[[限于序列]]；(c)通过以FW1‑CDR1‑FW2‑CDR2‑FW3‑CDR3的顺序逐步液相连接重链FW编码片段和CDR编码片段由所述HC片段文库组装，以产生人源化HC可变结构域编码文库；(c)通过以FW1‑CDR1‑FW2‑CDR2‑FW3‑CDR3的顺序逐步液相连接轻链FW编码片段和CDR编码片段由所述LC片段文库组装，以产生人源化LC可变结构域编码文库；(d)将所述组装的人源化重链可变结构域文库和组装的轻链可变结构域文库克隆至表达载体中，以形成人源化文库；(e)将所述人源化文库转染至细胞中；(f)在所述细胞中表达全长人源化抗体，以形成人源化抗体文库；(g)筛选所述人源化抗体文库，以测定所述人源化抗体的表达水平；和(h)筛选所述人源化抗体文库，以测定与所述模板抗体对抗原的亲和性相比的所述人源化抗体对抗原的亲和性。