[发明专利]用于通过同源重组转化和选择酵母转化体的盒和方法有效
| 申请号： | 201180072966.0 | 申请日： | 2011-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN103917648A | 公开（公告）日： | 2014-07-09 |
| 发明（设计）人： | 克里斯特勒·佩林-伊斯特;帕布洛·格卢尚科夫 | 申请（专利权）人： | 阿米卡纳生物技术公司 |
| 主分类号： | C12N15/64 | 分类号： | C12N15/64;C12N15/81;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 彭鲲鹏;卢蓓 |
| 地址： | 法国*** | 国省代码： | 法国;FR |
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| 摘要： | 本发明涉及用于选择具有通过同源重组整合的目的核酸片段的转化酵母细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(i)使酵母细胞与以下物质相接触：包含正选择基因和含夹有限制性位点之51和31重组区的同源重组位点的载体，以及待通过同源重组插入所述载体的同源重组位点中的目的核酸片段，所述核酸片段的侧翼是与同源重组位点的51和31重组区基本相同的区域；以及(ii)用所述载体和所述目的核酸片段转化所述酵母细胞；(iii)选择含有带所述正选择基因之所述载体的酵母细胞，所述酵母细胞的特征在于：负选择基因也存在于载体中同源重组位点的下游并且受位于所述同源重组位点上游的启动子控制，所述启动子与负选择基因在目的DNA片段插入之前在所述载体中可操作地连接；以及25(iv)所述方法还包括使用所述负选择基因选择含有所述目的DNA片段的酵母细胞的步骤。本发明还提供了用于实施本发明方法的盒和试剂盒。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 通过 同源 重组 转化 选择 酵母 方法 | ||
【主权项】：
一种用于选择转化酵母细胞的方法，所述酵母细胞具有通过同源重组整合于载体中的目的核酸片段，所述方法包括以下步骤：(i)使酵母细胞与以下物质相接触：‑包含以下的载体：○正选择基因，○包含夹有限制性位点的5’和3’重组区的同源重组位点，和‑待通过同源重组插入所述载体的所述同源重组位点中的目的核酸片段，所述核酸片段的侧翼是与所述同源重组位点的所述5’和3’重组区基本相同的区域；以及(ii)用所述载体和所述目的核酸片段转化所述酵母细胞；(iii)选择含有带所述正选择基因之所述载体的酵母细胞，其特征在于：‑负选择基因也存在于所述载体中所述同源重组位点的下游并且受位于所述同源重组位点上游的启动子控制，所述启动子与负选择基因在所述目的DNA片段插入之前在所述载体中可操作地连接；以及(iv)所述方法还包括使用所述负选择基因选择带有所述目的DNA片段的酵母细胞的步骤。
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