[发明专利]UPLC-TQD联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法

摘要

本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法。超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，该方法包括以下的步骤：1）对照品的配制；2）内标溶液的配制；3）样品溶液制备；4）流动相溶液的配制；5）色谱条件的设置；6）质谱条件的优化；7）样品测定；8）梯度浓度对照品溶液的配制；9）标准曲线制备；10）数据分析计算。本发明具有以下的特点：1、方法先进性；2、方法快捷高效，低损耗；3、临床应用前景及作用良好。

主权项

超高液相色谱‑三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）对照品的配制精密称取万古霉素、妥布霉素对照品，分别置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的对照品溶液，备用；2）内标溶液的配制精密称取阿替洛尔对照品，置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的内标溶液，备用；3）样品溶液制备精密量取骨髓炎患者术后引流组织液，置于具塞离心试管中，定量加入步骤2）的阿替洛尔内标溶液，涡旋混匀，精密加入乙腈沉淀蛋白，充分涡旋，高速离心后，分离上清液；上清液中加入适量二氯甲烷，充分涡旋，进行液液萃取，高速离心，定量吸取上清液，加等量纯水稀释，即得样品溶液，备用；4）流动相溶液的配制精密量取色谱纯乙腈，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0.1%的甲酸乙腈溶液，作为流动相A相，备用；精密量取纯水，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0.1%的甲酸水溶液，作为流动相B相，备用；5）色谱条件的设置选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为2.1×100mm ，填料内径为1.7μm的色谱柱；柱温为45℃，流动相流速为0.3ml/min；取步骤1）的对照品溶液与步骤2）的内标溶液，定量进样，进行梯度洗脱；采用二极管整列检测器进行色谱峰检测；6）质谱条件的优化选择三重四级杆质谱仪，正离子模式下，采用MRM扫描模式，万古霉素m/z：725‑144；妥布霉素m/z：468‑324；阿替洛尔m/z：267‑74；取步骤1）对照品溶液、步骤2）的内标溶液，定量进样，进行质谱分析，并由此得到对照品及内标物的标准质谱图；7）样品测定取步骤3）的样品溶液，分别定量进样，在步骤5）与步骤6）的条件下，测定，分别得到万古霉素、妥布霉素对照品、阿替洛尔内标物以及样品的总离子流图，样品图谱中，与万古霉素、妥布霉素对照品以及阿替洛尔内标物相同保留时间处，为引流液样品中的待测万古霉素与妥布霉素，以及定量加入的阿替洛尔内标物；8）梯度浓度对照品溶液的配制精密吸取步骤1）的对照品溶液，置于容量瓶中，加纯水，稀释成梯度浓度的万古霉素对照品溶液以及妥布霉素对照品溶液，备用；9）标准曲线制备取骨髓炎患者空白组织液多份，分别定量加入步骤8）的梯度浓度对照品溶液，按照步骤3）方法操作，得到梯度加标样品溶液，在步骤7）的条件下进行测定；以万古霉素峰面积与内标物峰面积的比值对万古霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为万古霉素的标准曲线：y=35.522x+0.1351，r=0.9981；以妥布霉素峰面积与内标物峰面积的比值对妥布霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为妥布霉素的标准曲线：y=16.593x‑0.0327，r=0.9959；其中y为被测物峰面积与内标物峰面积的比值，x为被测物质量浓度； 10）数据分析计算记录万古霉素，妥布霉素和阿替洛尔的峰面积，计算万古霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值和妥布霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值，分别代入各自的标准曲线，计算出万古霉素和妥布霉素的质量浓度；即为组织引流液中两种药物的局部浓度。