[发明专利]产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法

摘要

本发明公开了一种产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法，包括以下步骤：选择健壮无病虫害野生蛇足石杉植株，取当年抽生约3cm长的新枝为外植体；诱导产生叶状体并增殖成一团3cm直径的叶状体组织块，(1)叶状体分化启动培养基，(2)叶状体继代增殖培养基；叶状体分割继代培养。本发明的培养方法及基质配方为产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体的诱导和增殖提供了必需的环境条件。用本发明的方法进行蛇足石杉离体培养，可获得大量的蛇足石杉叶状体药用植物资源。利用这项发明扩大规模离体培养叶状体提取生产的药物石杉碱甲(Hup-A)将产生极为重大的经济价值。

主权项

一种产石杉碱甲的离体蛇足石杉叶状体诱导和增殖的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：(1.1)材料：蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.ex Murray)Trev.，选择健壮无病虫害的庐山野生蛇足石杉植株，取当年抽生约3cm长的新枝；(1.2)对外植体清洗消毒；(1.3)外植体接种在叶状体分化启动培养基上培养至切口处出现绿色小凸点，继续在叶状体分化启动培养基上培养10～15天，绿色小凸点发育成可辨的叶状体组织，此时的叶状体组织迅速增殖；叶状体分化启动培养基：1/2(6，7‑V)+NAA 0.1～1.0mg/L，蔗糖用量20～30g/L；(1.4)将诱导增殖的叶状体组织分割成小块，每瓶45ml左右培养基接种1.0g至1.5g，转接到叶状体继代增殖培养基上培养，叶状体继代增殖培养基：6，7‑V+NAA0.1～1.5mg/L或IAA0.1～1.0mg/L，蔗糖用量20～30g/L；(1.5)叶状体分割继代；一小部分叶状体切割作继代小块，接种到继代增殖培养基上继代培养，以后每40～50天转代一次，每代叶状体生物量鲜重比接种量增加8～13倍，建成叶状体无性繁殖系；另一大部分叶状体收获可提取石杉碱甲。