[发明专利]一步法构建携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体及其应用无效
| 申请号： | 201210014951.5 | 申请日： | 2012-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN102586327A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 夏海滨;李星 | 申请（专利权）人： | 陕西师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/861 | 分类号： | C12N15/861;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 710062 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种一步法构建携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体及其应用，在Ad5 D24条件复制型腺病毒载体基础上，经过以下两方面的改造以提高这类载体插入外源基因的构建效率：(1)突变腺病毒基因组上的BamHI位点；(2)通过同源重组的方法在fiber和E4之间引入BamHI和SfuI，从而可以通过酶切连接的方法一步将外源基因引入腺病毒基因组中。得到的携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体经药效试验，证明携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体可提高对肿瘤的治疗效果。 | ||
| 搜索关键词： | 一步法 构建 携带 基因 d24 纤维蛋白 修饰 条件 复制 病毒 载体 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种一步法构建的携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体，其特征在于，重组腺病毒载体Ad5 E1A中的24bp碱基缺失，该类型重组腺病毒载体可以在pRB null/mutant的肿瘤细胞中特异性复制；采用同源重组的方法将Ad5腺病毒基因组位于Hexon上第21468bp～21573bp的BamHI进行突变；在Ad5腺病毒基因组第31042bp处插入的修饰纤维蛋白为5/3，5/6，5/7，5/11，5/35序列中的任意一个；在Ad5腺病毒基因组fiber和E4之间即在Ad5腺病毒基因组第32788bp～32913bp处引入两个单一的酶切位点BamHI、SfuI，在Ad5腺病毒基因组引入的两个单一酶切位点之间插入一个用于筛选的表达元件；在Ad5腺病毒基因组引入的两个单一酶切位点之间插入双向表达框，该双向表达框携带一个报告基因和一个治疗基因，得到携带外源基因的D24纤维蛋白修饰的条件复制型腺病毒载体。
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