[发明专利]一种构建泡沫细胞模型检测食用菌中降血脂有效成分的方法

摘要

本发明属于生物细胞学中构建泡沫细胞模型对药用食用真菌中降血脂有效成分进行筛选的方法。该方法是通过采用氧化低密度脂蛋白OX-LDL诱导巨噬细胞RAW264.7造成脂肪变性的泡沫细胞，并结合油红O染色和测定细胞内的总胆固醇含量以及游离胆固醇和胆固醇脂的含量来检测胞内胆固醇的流出情况，以达到验证该巨噬细胞是否产生脂肪变性和损害以及药物对其治疗效果，通过检测泡沫细胞模型上的治疗效果来检测和筛选食用真菌中降血脂的有效成分。

主权项

一种构建泡沫细胞模型检测食用菌中降血脂有效成分的方法，包括以下步骤：（1）构建泡沫细胞模型：对巨噬细胞RAW264.7进行24孔板种板，毎孔接种量为2*104个处于对数期的细胞，培养至细胞贴壁率达到60—80%时进行分组，分别设置正常组，模型组，正对照组和加药组；正常组为贴壁率达到60—80% 正常巨噬细胞RAW264.7继续培养24 h；模型组为在贴壁率达到60—80% 的RAW264.7巨噬细胞中加入终浓度为70 µg/mL的氧化低密度脂蛋白进行诱导，继续培养24 h后形成泡沫细胞；正对照组为贴壁率达到60—80% 的巨噬细胞中同时加入终浓度为70 µg/mL的氧化低密度脂蛋白和终浓度为100ug/mL的辛伐他丁继续培养24 h；药物组为贴壁率达到60—80% 的巨噬细胞中同时加入终浓度为70 µg/mL的氧化低密度脂蛋白和终浓度和终浓度依次为50 µg/mL、100 µg/mL、200 µg/mL的浓度梯度的目的药物继续培养24 h；（2）细胞泡沫化程度的形态学观察：培养24h后，吸去培养基用PBS 冲洗细胞数次，中性甲醛固定30 min 后加入油红O 染液，37℃染色10 min，60%异丙醇脱色后进行倒置显微镜观察并拍照；（3）泡沫细胞脂流出的检测：12孔板按每孔2×104细胞数接种巨噬细胞RAW264.7，细胞融合达70‑80% 按上述第（1）步骤中方法分组为正常组、模型组、正对照组、药物组，弃掉陈旧培养基，换成10% 无脂蛋白血清的DMEM培养基培养，继续培养24 h后进行脂流出的检测。