[发明专利]一种牛膝多糖的提取与纯化方法

摘要

本发明公开了牛膝多糖的提取与纯化方法，包括以下步骤：A1牛膝多糖的粗提；A2牛膝多糖的纯化：A21 DEAE-Sepharose fast-flow柱色谱：ABP粗品溶于10mmol/L磷酸盐缓冲液，pH 6.8，使其浓度约为30％，每次上样量60L；DEAE-Sepharose fast-flow柱预先用上述缓冲液平衡，上样后，用同样缓冲液洗脱，流速约300ml/min，按旋光检测收集多糖组份，然后减压浓缩；A22 Sephadex G-150柱色谱：浓缩液上Sephadex G-150柱，用0.2mol/L NaCl洗脱，按旋光检测收集多糖组分；经中空纤维透析器对蒸馏水透析脱盐，减压浓缩，冷冻干燥，得白色冻干粉ABP。采用本发明的方法提高了总多糖的含量及其纯度。

主权项

一种牛膝多糖的提取与纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A1牛膝多糖的粗提：将新鲜牛膝根晒至干皱，含水份＜7％，用粉碎机粉碎并过筛；称取约60目牛膝根粉，装入多功能提取罐，加工业乙醇，加热80℃回流4h；滤除乙醇，残渣减压蒸发至干，再装入提取罐；每次加蒸馏水，在100℃下搅拌提取3次，每次时间分别为5h、4h、3h；3次提取液合并，加热至沸，在搅拌下缓缓加入1％鞣酸溶液，待反应完全，继续煮沸15min，加入三次合并的提取液重量的2％活性炭，搅拌10min，抽滤除去沉淀及活性炭，得无色澄清滤液；滤液经中空纤维透析器对蒸馏水透析至无鞣酸为止；然后真空浓缩至约为三次合并的提取液原体积的1/10；浓缩液内加入3倍重量的80％乙醇，调PH至10，得白色沉淀；沉淀用80％乙醇洗涤几次，然后依次用90％、95％和无水乙醇脱水，60℃真空干燥，得粗品ABP；A2牛膝多糖的纯化：A21 DEAE‑Sepharose fast‑flow柱色谱：ABP粗品溶于10mmol/L磷酸盐缓冲液，pH 6.8，使其浓度约为30％，每次上样量60L；DEAE‑Sepharose fast‑flow柱预先用上述缓冲液平衡，上样后，用同样缓冲液洗脱，流速约300ml/min，按旋光检测收集多糖组份，然后减压浓缩；A22 Sephadex G‑150柱色谱：浓缩液上Sephadex G‑150柱，用0.2mol/L NaCl洗脱，按旋光检测收集多糖组分；经中空纤维透析器对蒸馏水透析脱盐，减压浓缩，冷冻干燥，得白色冻干粉ABP。