[发明专利]一种烟草黑胫病病菌液固复合体系培养方法及培养物应用

摘要

本发明公开了一种烟草黑胫病病菌液固复合体系培养方法及培养物应用，该法培养获得的固体物可用于烟草黑胫病的人工接种物，也可用于制备带烟草黑胫病病菌病土的添加物，以便测定烟草品种对黑胫病的抗感性、筛选防治烟草黑胫病的药剂或生防菌、天然产物。其培养步骤包括（A）病菌分离，从发病田块中采集病株，经过分离、纯化、致病力测定，获得病菌；（B）平板培养，将病菌接种于培养基平板上，24~30℃下培养5~7天；（C）液体培养，将平板菌丝接种于培养液中，24~30℃、150转/分钟振荡培养5~7天；（D）固体培养，将液体菌丝接种于固体培养基，24~30℃培养8~12天。本发明具有接种量大、培养周期短、不易污染等优点。

主权项

一种烟草黑胫病病菌的液固复合体系培养方法，包括病菌分离、平板培养、液体培养、固体培养，其特征在于培养方法具体包括以下步骤：A、病菌分离，从发病田块中采集病株，经过分离、纯化、致病力测定，获得病菌，将菌种采用菌丝块水浸法置于10℃条件下恒温保存，备用；B、平板培养，将病菌接种于培养基平板上，于24~30℃温度下培养5~7天，选择菌丝纯白色，在平板表面密布一层菌丝的培养物，用作液体培养菌种； C、液体培养，将B步骤得到的平板菌丝接种于培养液中，于24~30℃温度下，130~150r/min转速下振荡培养5~7天，培养得到的液体菌液中菌丝白色、菌液不浑浊、菌丝不成团，镜检可发现游动孢子囊和游动孢子或休止孢，每毫升孢子含量在1万个以上；D、固体培养，将C步骤得到的液体菌丝接种于固体培养基，24~30℃培养8~12天，培养得到的固体培养物整个基质布满白色菌丝，菌丝经过液体浸泡、低温诱导、室温释放孢子，镜检可见游动孢子囊和游动孢子或休止孢，每毫升孢子含量在10万个以上。