[发明专利]一种用改良STELA法测细胞中最短端粒长度的方法

摘要

本发明涉及一种用改良STELA法测细胞中最短端粒长度的方法。本发明涉及一种改良的STELA法，可以有效快速地检测研究细胞染色体短端粒长度和所占的比例。该改良STELA法与传统的STELA法相比，在连接telorette之前多了一步连接反应。其可以检测最短端粒长度，而现有技术只能检测平均端粒长度，扩大应用范围，同时更加准确可以简便，快速，直观的测量样品中最短端粒的长度以及其所占的比例。

主权项

一种用改良STELA法测细胞中最短端粒长度的方法，其特征在于按步骤实现：A、限制性内切酶消化：细胞中提取的gDNA经过MseI和NdeI两种限制性内切酶酶切摩尔比1：1；B、Linker寡核苷酸连接： Linker通过互补配对连接到各个gDNA片断的5’‑TA‑3’； 其中linker为11+2‑mer oligo 和42‑mer oligo ；11+2‑mer oligo的序列为5’‑TAC CCG CGT CCG C‑3’；42‑mer oligo的序列为5’‑TGT AGC GTG AAG ACG ACA GAA AGG GCG TGG TGC GGA CGC GGG‑3；C、Telorette片断的连接： telorette被连接到端粒的5’端；其中Telorette序列如下，可任选择其中一个序列：5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCC CCT AAC‑3’；5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCT AAC CCT‑3’；5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCC CTA ACC‑3’；5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCC TAA CCC‑3’；5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCA ACC CTA‑3’； 5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TCA CCC TAA‑3’；D、PCR扩增端粒片段，其中引物为5’‑TGT AGC GTG AAG ACG ACA GAA‑3’，5’‑TGC TCC GTG CAT CTG GCA TC‑3’‑标记物。