[发明专利]一种改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法

摘要

本发明涉及一种改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，步骤包括：取直链淀粉含量25%以上水稻品种的成熟胚为外植体，诱导愈伤组织，继代培养至成倍增殖期，暗条件预培养，进行农杆菌共培养转化，转移到筛选培养基进行3轮筛选，取抗性愈伤组织诱导分化成苗，对抗性植株进行标记基因组织化学染色和筛选基因分子检测，鉴定含目的基因淀粉合成酶ssIII-2插入序列的分化小苗，对入选的转基因植株进行热米饭的抗性淀粉含量检测，选留抗性淀粉含量高于10%的转基因植株，继续种植评价抗性淀粉含量的表达稳定性，繁殖抗性淀粉含量稳定高于10%的优良株系。本发明的改良抗性淀粉含量的水稻，对糖尿病人群实施饮食疗法具有重要意义。

主权项

一种改良抗性淀粉含量的水稻的培育方法，包括以下步骤：1）取直链淀粉含量25%以上水稻品种的成熟胚为外植体，接种至诱导培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导形成愈伤组织； 2）将诱导形成2周的愈伤组织，转移至继代培养基，继代培养至愈伤组织进入成倍增殖期； 3）将成倍增殖的愈伤组织，在25±1℃避光的黑暗条件下进行受体愈伤组织的预培养2天；4）将经过预培养的愈伤组织，在农杆菌悬浮液中浸泡10分钟，之后弃去菌液，用无菌滤纸吸干，接种于共培养基上，在25±1℃避光的黑暗条件下共培养2天；5）将上述共培养愈伤组织，洗净、晾干后，转移到筛选培养基，在25±1℃避光的黑暗条件下培养6周，收集新长出的抗性愈伤组织，转移至新的筛选培养基上，再进行连续2轮继代筛选，每隔3周转继１次；6）取3轮筛选后的抗性愈伤组织，转移至分化培养基，在25±1℃、光强3000勒克司光条件下诱导分化成苗，对抗性植株进行组织化学染色和分子检测，选留含目的基因插入序列的的转基因植株，所说的目的基因插入序列是指目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII‑2、标记基因葡糖苷酸酶基因GUS和筛选基因抗潮霉素基因HPT的插入序列，目的基因可溶性淀粉合成酶基因ssIII‑2片段长780bp；7）取入选的转基因植株，田间种植后收获种子，测定热米饭的抗性淀粉含量，选留抗性淀粉含量高于10%的转基因植株；8）继续种植步骤7）筛选的转基因株系，评价抗性淀粉含量的表达稳定性，繁殖抗性淀粉含量稳定高于10%的优良株系，为培育的改良抗性淀粉含量的水稻。