[发明专利]一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法无效
申请号: | 201210040790.7 | 申请日: | 2012-02-22 |
公开(公告)号: | CN102533711A | 公开(公告)日: | 2012-07-04 |
发明(设计)人: | 江波;张涛;周林芳;沐万孟;缪铭 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N11/08 | 分类号: | C12N11/08;C12R1/01 |
代理公司: | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人: | 时旭丹;刘品超 |
地址: | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 一种D-塔格糖3-差向异构酶固定化方法,属生物工程技术领域。本发明步骤是:(1)预处理菌体获得目的酶液;(2)预处理离子交换树脂;(3)向处理好的大孔离子交换树脂中加入D-塔格糖3-差向异构酶液进行吸附后,加入戊二醛溶液进行交联,用去离子水洗涤以除去游离酶和未交联的戊二醛,即得到固定化的D-塔格糖3-差向异构酶。本发明以离子交换树脂为载体,通过先吸附后交联的方法固定了D-塔格糖3-差向异构酶,该法操作简单,成本低廉,固定的D-塔格糖3-差向异构酶储存稳定性和操作稳定性高,有较宽的pH适应性,固定化酶活回收率可达50%以上。 | ||
搜索关键词: | 一种 塔格糖 差向异构 固定 方法 | ||
【主权项】:
一种D‑塔格糖3‑差向异构酶固定化方法,其特征在于包括下列步骤:(1)获取酶液:称取R.sphaeroides SK01l发酵菌体,按质量体积比1:10的比例,加入50mmol/L Tris‑HCl、50mmol/L NaCl、pH7.0‑8.0缓冲液重悬菌体,利用超声波细胞破碎仪处理菌体后,在转速为6000~10000r/min、温度为0~5℃的条件下离心10~30min,收集上清液,此上清液即为D‑塔格糖3‑差向异构酶液;(2)离子交换树脂处理:采用313、或D301‑Ⅲ离子交换树脂,先用去离子水浸泡胀润、去杂,接着用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性,再用质量浓度4%HCl溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性,最后用质量浓度4%NaOH溶液浸泡12h后去离子水清洗至中性,用两倍树脂体积的去离子水浸泡,4℃下保存;(3)固定化:采用先吸附后交联的方法,向处理好的离子交换树脂中加入D‑塔格糖3‑差向异构酶液,每g树脂加入D‑塔格糖3‑差向异构酶粗酶液1‑6mL,并加入上述Tris‑HCl缓冲液补足6mL,于pH 7.0~8.0、20~40℃吸附6~12h后取出;加入戊二醛溶液至终浓度为0.01%~0.2%,于2~8℃轻轻振荡交联1~5h,用去离子水洗涤以除去游离酶和未交联的戊二醛,即得到固定化的D‑塔格糖3‑差向异构酶。
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